方法論記事

Lamina propria単核細胞単離:マウス結腸から単核細胞を得るためのシリカベースの密度勾配遠心分離技術

2023年4月30日

この記事について

要約

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出典:McManus, D. et al.コラゲナーゼEを用いたマウス結腸からの固有層単核細胞の単離。J. Vis. Exp.(2019年)

このビデオでは、コラゲナーゼEを用いた酵素消化とシリカベースの密度分離培地勾配分離によるマウスの結腸組織からの固有層単核細胞の単離を実演します。単離された単核細胞は、その後の下流分析に使用できます。

プロトコル

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動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 溶液の準備

  1. 表1に記載されているように、コロンバッファー、シリカベースの密度分離培地100%、シリカベースの密度分離培地66%、シリカベースの密度分離培地44%、コラゲナーゼE消化バッファー、およびFACSバッファーを調製します。
    1. 手順の前日にコロンバッファーを調製し、4°Cで一晩保存してください。
    2. 処置の前日に100%シリカベースの密度分離培地を調製し、4°Cで一晩保存し、処置の朝に室温で解凍します。
    3. 単離の朝に、室温の100%シリカベース密度分離培地とコロンバッファーを使用して、66%および44%シリカベースの分離培地を調製します。
    4. Clostridium histolyticum由来のコラゲナーゼEの適切な量を測定し、手順の前に-20°Cで一晩保存します。翌朝、適切な量のColon Bufferに溶解して、Collagenase Digestion Bufferを導き出します。手順の日にコラゲナーゼ消化バッファーを使用したすべてのインキュベーションでは、溶液を37°Cに予熱してください。
  2. プロトコールの全ステップ....

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開示事項

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利益相反は宣言されていません。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
60mmシャーレサーモサイエンティフィック150288
1x PBSのコーニング21-040-履歴書
10倍PBSロンザ・ビオウィテカーBW17-517Qの
10 mL ディスポーザブル血清ピペットコーニング4100
10 mLシリンジベクトン・ディキンソン302995
15 mL 非滅菌コニカルチューブトゥルーラインTR2002
18gブラントニードルベクトン・ディキンソン305180
25 mL ディスポーザブル血清ピペットコーニング4250
40μmの細孔サイズセルストレーナーコーニング352340
50 mL ファルコンチューブコーニング21008-951
ウシ血清アルブミン(BSA)シグマA4503-1KGの
固定バッファバイオレジェンド420801
大腸菌 コラゲナーゼE Clostridium histolyticum由来シグマC2139
EDTA、0.5 M 滅菌溶液アムレスコE177-500ミリリットル
ウシ胎児血清サーモ/フィッシャーサイエンティフィック-HyCLone03 SV30014
ヘープスGEヘルスケア-ハイクローン01 SH30237月
パーコールGEヘルスケア-ライフサイエンス1708901
RPMIミディアムコーニング17-105-CV
アジ化ナトリウムVWRライフサイエンスアムレスコ97064-646
トリパンブルーロンザ・ビオウィテカー17-942E
円 名 の

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