マウスモデルにおけるがん細胞の粘膜内接種:同所性頭頸部がんマウスモデルを確立するための手順

要約

出典:Oweida, A. J. et al.腫瘍免疫プロファイリングと治療反応評価のためのマウスにおける扁平上皮がん細胞の粘膜内接種。J. Vis. Exp.(2019年)

この動画では、扁平上皮がん細胞株の粘膜内接種による同所性頭頸部がんマウスモデルを開発しています。この担がんマウスは、ヒト疾患の臨床的に関連する症状に類似しているため、がんの進行を研究し、新たな治療戦略を発見するために使用できます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. マウスへの細胞注入

1. 細胞:基底膜マトリックス(各50μL)の1:1混合物を調製します。
2. 最初に細胞を追加し、次に基底膜マトリックスを徐々にピペットで動かします。気泡の持ち込みを避けてください。混合物が動物注射の直前に作られていることを確認してください。基底膜マトリックスに細胞を長期間添加すると、マトリックス混合物に細胞が沈降し、混合物が激しく振とれにくくなります。これにより、マウス間で腫瘍サイズにかなりのばらつきが生じます。
3. やさしく混ぜます。マトリックスを含むすべてのステップが氷上で実行されることを確認します。基底膜マトリックスは室温で重合します。
4. 接種用の注射器を準備します。
5. 0.5 mL インスリンシリンジ (23G) に 100 μL の細胞/基底膜マトリックス溶液をロードします。
6. シリンジを氷の上に置いて、基底膜マトリックスの重合を避けてください。
7. マウスをイソフルランと酸素(2.5%)の入ったチャンバーに入れて麻酔をかけます。
8. 注射を行う前に、マウスが深く麻酔されていることを確認してください(つま先のつま先をつまむことに対する反応の欠如を確認することにより)。
9. 針を右または左の頬側領域に挿入します。これは、口の両側にある利用可能なオープンスペースを通じて実行されます。
10. マウスの舌が邪魔にならないことを確認します。
    注:舌をつつくのは簡単で、舌の腫瘍を引き起こします。必要に応じて舌を反対側に動かします。
11. 口腔内にいる間、注射器を頬側と平行に保ちます。
12. 注入する準備ができたら、シリンジを後ろに引き、シリンジを10°の角度でゆっくりと挿入します。
13. 細胞/基底膜マトリックス懸濁液100μLを5秒間注入します。
14. シリンジをさらに5秒間所定の位置に保持して、すべての材料が注入されていることを確認します。
    注:対照の非腫瘍担持マウスの場合は、腫瘍細胞なしで無血清培地とマトリックス(上記のように)の混合物を注入します。
15. シリンジを静かに引き抜きます。
16. 残りのマウスで上記の手順を続けます。
17. 腫瘍が肉眼的に現れ始めるまで1週間待ちます(B4B8およびLY2細胞の場合は50〜200 mm³)。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
HBSSの	サーモフィッシャーサイエンティフィック	14175079	カルシウム、マグネシウム、フェノレッドなし
Heloisマスサイトメーター	フルイダイム	NAの
マトリゲル膜マトリックス	コーニング	CB-40234Bの