ひよこ絨毛尿膜の収穫:鶏卵から腫瘍移植片含有絨毛膜を単離する方法

要約

出典:Schmidt, L. B. et al.頭頸部がんの神経周囲浸潤を評価するためのひよこ絨毛尿膜In vivoモデル。J. Vis. Exp. (2019年)

このビデオは、ニワトリの胚からの腫瘍担持性絨毛膜の分離を示しています。収穫されたCAMは、さらなる下流のアプリケーションに使用できます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. CAMのハーベスティング

1. 4% PFA(パラホルムアルデヒド)pH 7.0の6ウェルプレートを調製します。卵1個につき1ウェル、1ウェルにつき2 mLです。
2. 卵を実験室のベンチに持っていきます。シリンジに取り付けられた針を使用してフィルムドレッシングを穿孔し、CAM上に約300μLのPFAを滴下してCAMをわずかに硬化させ、収穫プロセスを容易にします。これをすべての卵に対して繰り返します。
3. はさみで、CAMが取り付けられた卵殻の上半分(手術窓がある場所)を取り外します(図1I)。この半分のサイズを直径約3cmに縮小します。CAMを細い鉗子でつかみ、PFAに入れながら卵殻から取り外します。

結果

図1:DRG、細胞の移植、およびCAMの収穫:8日目:A。パラフィンワックス膜除去後のCAM観察が容易である。細い鉗子を使用して、DRGはCAM上に置かれます。卵をフィルムドレッシングで覆い、インキュベーターに入れます。矢印は覆われている開口部を指しています。10 日目: E-F。フィルムドレッシングが取り除かれ、DRGが配置されます(Fの矢印の先端)。 G-H.5 μL の細胞溶液を DRG から ~2 mm の距離で CAM に滴下します。17 日目: I-L と M-P は、CAM の回収に使用される 2 つの異なるアプローチを示しています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
PFA(パラホルムアルデヒド溶液)	シグマ・アルドリッチ	#P6148-1KG	水で希釈して4%PFA溶液を作ります
ファインサージカルストレートシャープハサミ	ファインサイエンスツール(FST)	#14060から09	17日目にCAM組織を採取するために使用
受精ローマンホワイトレッグホーン卵			早期受精日、できれば受精後初日に受精卵。このプロトコルで使用される卵は、ミシガン州立大学の養鶏場からのものです
極細グレーフ鉗子、ストレート	ファインサイエンスツール(FST)	#11150から10	8日目にDRGをCAMにグラフトし、17日目にCAM組織を採取するために使用されます

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