miRNA阻害剤による腫瘍内治療のモデリング:マウスモデルにおけるmiRNA阻害剤の腫瘍増殖への影響を分析する方法

要約

出典:Ramirez-Moya, J. et al.マウスの腫瘍増殖を減少させるためのマイクロRNAのin vivo阻害。J. Vis. Exp.(2019年)

このビデオは、同所性マウスモデルにおける腫瘍増殖に対する治療薬としてのmiRNA阻害剤のin vivo送達を示しています。合成miRNA阻害剤またはアンタゴmiRの腫瘍内投与により、内因性miRNAに結合して阻害することができ、それによってmRNAのアップレギュレーションと腫瘍増殖の抑制が引き起こされます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 細胞の側面接種と腫瘍内拮抗薬治療

1. 細胞調製
   1. Cal62ヒト甲状腺がん細胞株(KRASG12Rおよびp53A161D変異)を操作して、GFPおよびルシフェラーゼ(CMV-Firefly Luc-IRES-eGFP)を構成的に発現するトランスジェニックコンストラクトを過剰発現させます。トランスジェニック細胞は、抗生物質耐性によって、またはフローサイトメトリーでGFP陽性細胞を選別することによって選択します。
   2. ペニシリン、ストレプトマイシン、および10%ウシ胎児血清(FBS)を添加したダルベッコ改変イーグルス培地(DMEM)で細胞を37°Cおよび5%_CO2で増殖させます。
   3. 1 x 10⁶細胞を50 μLのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に4°Cで懸濁します。
2. マウスの脇腹への細胞接種
   1. 細胞を同量の基底膜マトリックスと混合します。例えば、50 μL の PBS に 1 x 10⁶ 個の細胞を 50 μL の基底膜マトリックス (材料の表を参照) に加え、穏やかに混合します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
基底膜マトリックス:マトリゲル基底膜マトリックス高濃度	コーニング	#354248
AntagomiR:mirVana miRNA阻害剤	サーモフィッシャー	4464088	In vivo対応
In vivo導入試薬:Invivofectamine 3.0 Reagent	サーモフィッシャー	体外受精3005
ネガティブコントロール:mirVana miRNA Inhibitor, ネガティブコントロール #1	サーモフィッシャー	4464077	In vivo対応
XenoLight D-ルシフェリン - K+ 塩生物発光基質	パーキンエルマー	122799	PBSで希釈
In vivoイメージングソフトウェア:IVISLumina II Imaging System	キャリパーライフサイエンス