マウス甲状腺への甲状腺がん細胞の同所性接種:同所性甲状腺がんマウスモデルを確立するための手順

要約

出典:Julia Ramirez-Moya, et al. マウスの腫瘍増殖を減少させるためのマイクロRNAの生体内阻害 J. Vis. Exp. (2019)

このビデオでは、マウスモデルの甲状腺に甲状腺がん細胞を同所性で接種する手順を説明しています。これは、発がんを評価し、潜在的な治療戦略を発見するための貴重なプラットフォームとして機能する可能性があります。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 細胞の甲状腺同所性接種

1. 細胞調製
   1. Cal62ヒト甲状腺がん細胞株を操作して、GFPとルシフェラーゼを構成的に発現するトランスジェニックコンストラクトを過剰発現させます。トランスジェニック細胞は、抗生物質耐性によって、またはフローサイトメトリーでGFP陽性細胞を選別することによって選択します。
   2. これらの細胞を、抗生物質(ペニシリンおよびストレプトマイシン)および10%FBSを37°Cおよび5%CO₂で添加したDMEMで増殖させます。
   3. 1 x 10⁵細胞を5 μLのPBSに懸濁します。
2. マウスの甲状腺への細胞接種
   1. 100 μL の鎮痛剤 (ブプレノルフィン) と 100 μL の抗生物質 (セファロスポリン) を 7 週齢の BALB/c nu/nu マウスに皮下注射します。注射部位をアルコールで消毒します。
   2. マウスの甲状腺に5μLの細胞溶液を注入します。
      1. 酸素を混合した 3% イソフルランを使用してマウスに麻酔をかけ、無菌フロー キャビネット内の実体顕微鏡下に置きます。ペダル反射 (つま先をしっかりとつまむ) によって麻酔のレベルを評価し、必要に応じて麻酔薬の送達を調整して手術面を維持します。
      2. 乾燥を防ぐために両目に眼科用軟膏を塗布します。.
      3. マウスごとに、ヨードポビドンで首を消毒し、はさみで皮膚に約2cmの切開を行います。開いたら、唾液腺をずらして首を露出させます。
      4. 解剖鉗子やハサミを使用してストラップの筋肉を解剖し、気管と甲状腺を露出させます。10 μLシリンジを使用して、輪状軟骨の側面にある右甲状腺小葉に5 μLの細胞溶液を注入します。
      5. 唾液腺の位置を変え、編組、コーティング、非吸収性縫合糸を使用して、切開部をシルクで縫合します。
      6. 創傷部分にヨードポビドンを加え、麻酔から回復するまでマウスを熱毛布の上に置きます。
   3. 術後翌日、鎮痛剤(ブプレノルフィン)を皮下注射し、250mLの飲料水に3mLの液体イブプロフェン(40mg/mL)を1週間加えます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
基底膜マトリックス:マトリゲル基底膜マトリックス高濃度	コーニング	#354248
In vivo導入試薬:Invivofectamine 3.0 Reagent	サーモフィッシャー	IVF3005
In vivoイメージングソフトウェア:IVIS-Lumina II Imaging System	キャリパーライフサイエンス