DAPI染色を用いた細胞死スクリーニング:がん細胞株におけるIR誘導クローン性細胞死の迅速スクリーニング法

Abstract

出典: Kobayashi, D. et al. 蛍光顕微鏡による放射線誘発クローン細胞死の様式の評価のためのワンステッププロトコル。 (2017年)

このビデオは、DAPI染色アッセイを使用して電離放射線(IR)誘発がん細胞株の主要な細胞死プロファイルをスクリーニングする方法を示しています。細胞死を受けている標的細胞のDAPI染色された核は、明確な形態を示し、蛍光顕微鏡で容易に同定できます。

Protocol

1. 材料の準備

1. オートクレーブカバースリップ
   1. カバースリップをガラスビーカーに入れます。
   2. ガラスビーカーをホイルで覆います。
   3. 121°C、15psiで20分間オートクレーブします。
   4. 50°Cで乾燥させ、培養フードに室温で保存します。
2. 固定液を調製します:3%パラホルムアルデヒド+ 2%スクロースをリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に溶かします。
   1. 1,000 mLのガラス瓶に、700 mLのPBSと30 gのパラホルムアルデヒドを加えます
      注意：パラホルムアルデヒドは腐食性がありますので、適切な手袋を着用してください。
   2. パラホルムアルデヒドを電子レンジで80°Cに加熱し、完全に溶解します
      注意：パラホルムアルデヒドの煙は有毒ですので、マスクを着用してください。
   3. 室温で一晩放置します。
   4. スクロース20gを加えます。
   5. PBSを追加して、合計容量を1Lにします。
   6. 50mLチューブで分注します。.固定液は、-20°Cで3年間、または4°Cで3ヶ月間保存できます。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
カバースリップ	松波	C013001
パラホルムアルデヒド	シグマ・アルドリッチ	P6148-1KG
蔗糖	シグマ・アルドリッチ	84097から250G
リン酸緩衝生理食塩水	コスモバイオ	16232000
メス	貝印メディカル	No.20、520-A
35 mm細胞培養ディッシュ	隼	353001
逆位相顕微鏡	島津	114から909
X線照射器	Faxitron バイオオプティクス	ファックストロン RX-650
スクエアカルチャーディッシュ	コーニング	431110
スライドガラス	松波	プロ-11
DAPI染色試薬	細胞シグナル伝達	8961Sの
蛍光顕微鏡	ニコン	エクリプスNi
蛍光顕微鏡 DAPIフィルター	ニコン	U-FUW、BP340-390、BA420IF、DM410
蛍光顕微鏡レンズ (20×)	ニコン	プランアポλ 20X/0.75
蛍光顕微鏡レンズ(60×、油彩)	ニコン	プランアポλ60X / 1.40オイル
油	オリンポス	N5218600
CCDカメラ	ニコン	DS-Qi2
デジタル画像取り込みソフトウェア	ニコン	NIS-Elements ドキュメント
レンズクリーナー	オリンポス	OT0552
クロロホルム	和光	035-02616