患者由来腫瘍異種移植:尿路上皮細胞癌評価のための実験マウスモデル作製技術

要約

出典:Moret, R. et al.ヒト尿路上皮細胞癌および結腸直腸癌腫瘍の成長と自然転移に対する患者由来の同所性異種移植モデル。J. Vis. Exp.(2019年)

このビデオでは、尿路上皮細胞がんの進行を研究するために使用できる実験的な異種移植マウスモデルを生成する手順について説明しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. UCCマウスモデル

1. 手続きのためのマウスの準備
   1. 生後6〜8週齢の雌用NOD/SCIDマウスを入手します。脱毛クリームを使用してマウスの腰を剃ります。イソフルラン(100%酸素中2.5%、1L /分)を含む誘導チャンバーでマウスを麻酔します。
   2. 鎮静したら、マウスを仰臥位にして、鼻をイソフルランノーズコーンに入れ、裸で分散電極にしっかりと接地します
      注意: マウスは、つま先のつま先をつまんでも反応しない場合、完全に鎮静されます。
2. 回収したUCC腫瘍細胞を採取し、50 μL RPMI培地に再懸濁します。血管カテーテルを使用してUCC細胞を膀胱に注入します(図1Aa、Ab)。
   1. モノポーラ電気焼灼機をセットアップし、4 W.の電力に設定します。 潤滑ゼリーで24 G滅菌血管カテーテルを潤滑し、雌マウスの尿道を通して挿入します
      注意: わずかな抵抗を感じる場合があります。血管カテーテルをゆっくりと前方に押すか、取り外して繰り返します。無理に押し込まないでください。カテーテルが挿入時に曲がる場合は、安定性を確保するために、滅菌ガイドワイヤーをカテーテルの途中まで挿入してください。
   2. 血管カテーテルの端から1mm先に0.025インチの固定コアストレートガイドワイヤーを完全に挿入します
      注意: ワイヤーは、1 mmの停止点を示し、一貫性を確保するために、手順の前にテープでマークされています。
   3. モノポーラピンをガイドワイヤーに1秒間保持し、膀胱粘膜を電気的に刺激します。
   4. 新鮮な滅菌血管カテーテルを1 ccのLuer-Lokシリンジに取り付け、採取した細胞200 μLを吸引します
      注:血管カテーテルからシリンジまで、少なくとも100μLが失われます。必要な細胞懸濁液の量を計算する際に、損失量を補償します。
   5. マウスの尿道からガイドワイヤーと血管カテーテルを取り外してください。尿道に付着した細胞の注射器で血管カテーテルを挿入します.
      注:進行は以前よりも簡単になるはずです。
   6. マウスの膀胱に50μLの細胞を注入します。数秒待ってから血管カテーテルを取り外し、細胞が膀胱壁に付着するのを待ちます
      注:細胞は膀胱に残り、原発腫瘍に発展します。

結果

図1:同所性UCCマウスモデル。(AA)雌のNOD/SCIDマウスの膀胱に血管カテーテルを挿入し、ガイドワイヤーを介して膀胱壁に電気焼灼ショックを加えた。(アブ)ルシフェラーゼタグ付きUCC腫瘍細胞、BlCaPt15(2 x 10⁴細胞)、またはBlCaPt37(5 x 10⁵細胞)に3 x 10⁵ LN間質HK細胞を添加して、血管カテーテルを介してNOD / SCIDマウス膀胱に注入しました。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
脱毛クリーム	チャーチ&ドワイト株式会社	1(800)248-8820
イソフルラン	ヘンリー・シャイン動物衛生	108333
6-8週齢のNOD/SCIDマウス(雌)	ジャクソン研究室	1303
鉗子	シンメトリーサージカル株式会社	06-0011
電気メス発電機	バレーラボ	FORCE1C20
イソフルラン誘導チャンバー	パーキン・エルマー	119038

名