脱細胞化ラット腎臓の調製:採取したラット腎臓から無細胞血管全臓器足場を生成する手順

要約

出典:Kim, E. H. et al. ラットにおける脱細胞化腎臓足場の調製 (2021)

このビデオでは、脱細胞化したラット腎臓の準備について説明しています。得られた無細胞血管足場は、臓器移植片の組織工学のための有望なプラットフォームとして役立つことができます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 腎臓の採取と脱細胞化

1. 腹部大動脈と下大静脈で左腎臓を収穫します。
2. 尿管、胸部大動脈、上大静脈、および腹部大動脈の枝を結紮します。
3. 10cmのシャーレに入ったダルベッコのPBS(DPBS)で臓器を水分補給します。
4. 腹部大動脈と下大静脈を23Gカテーテルでカニューレします。残留血液を除去するには、カニューレを蠕動ポンプに接続し、DPBS(500 mL)および16 U/mLヘパリンで37°Cで5 rpmの速度で90分間洗浄します。
5. 腎臓を脱細胞化するには、腎臓に1%トリトンX-100(1L)を3時間注入し、次に0.75%ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)溶液(2L)を40mmHgの一定圧力で6時間注入します
   手記：腎臓は8時間後に透明になります。
6. 残留 SDS を除去するには、サンプルを 1% ペニシリンを蒸留水 (6 L) で 18 時間 (一晩) 灌流し、次に滅菌 DPBS(500 mL) と 16 U/mL ヘパリンを 90 分間灌流します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ポリエチレン50チューブ、カテーテルチューブ100フィート	ブレインツリー・サイエンティフィック	.023インチ × .038インチ
3-0 ラットにおけるシルクスプール血管アクセス/結紮	ブレインツリー・サイエンティフィック	SUT-S 110
筋膜/結合組織を切断するための細いはさみ	ファインサイエンスツール	14058から09
25ゲージインチガイドニードル(血管カテーテル用)	ベクトン・ディキンソン	305145
Schwartz microserrefine血管クランプ	ファインサイエンスツール	18052-01(ストレート)
5-0 マウスにおけるシルクスプール血管アクセス/ライゲーション	ブレインツリー・サイエンティフィック	SUT-S 106