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固相マイクロ抽出サンプリング:グラフト組織からのサンプル抽出のためのプローブベースの手法

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

出典:Stryjak, I. et al. Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment. J. Vis. Exp. (2020)

このビデオでは、採取済みのドナー腎臓からの代謝物のSPMEプローブベースの抽出を実演します。抽出された代謝物は、移植のための臓器の質を評価するために、メタボロームおよびリピドミクス分析を行うために使用できます。

Protocol

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

人間の福祉に関する制度的、国内的、国際的なガイドラインに準拠して実施され、地元の施設審査委員会によって審査されています。

1. プローブの準備

  1. チタン-ニッケル合金プローブ(長さ40 mm、直径0.2 mm)を7 mmミックスモード吸着剤でコーティングしたプローブを準備します。プローブの数は、手順全体で目標とする時点と反復回数によって異なります(各時点につき3回を推奨).
    手記:抽出フェーズの長さと種類は、研究モード、代謝物の極性、およびサンプルマトリックスに基づいて調整できます。
  2. 2:1のクロロホルム:メタノール(v / v)で構成される洗浄混合物を準備します。溶液1.0mLを各2.0mLガラスバイアルにピペットで移し、事前にキャップに穴を開けたプローブを1つ、各バイアルに入れます
    手記:使用する前に、すべてのプローブを清掃して、汚染粒子を取り除
  3. いてください。
  4. バイアルを攪拌機に載せ、攪拌速度を1,200rpmに設定します。45分後、デバイスを停止し、コーティングをLC-MSグレードの水ですすいでください。
  5. コーティングを活性化するにはプレコンディショニングステップを経る必要があるため、1:1メタノール:水(v / v)で構成されるプレコンディショニング混合物を準....

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Disclosures

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
利益相反は宣言されていません。

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
酢酸メルク5330010050移動相添加剤
アセトニ トリルアルケム696-34967-4X2.5LHPLC溶媒
酢酸アンモニウムメルク5330040050移動相添加剤
BENCHMIXER XL マルチチューブボルテクサーベンチマーク・サイエンティフィックBV1010ボルテックスミキサー
キャップPerlan Technologies(パーラン・テクノロジーズ)〒5183-2076ブルースクルーTP、スリット済みPTFE / Si SPTA、100PK
クロロホルムメルク1024441000
Discovery HS F5 Supelguard カートリッジ、3 μm、L × I.D. 2 cm × 2.1 mmメルク567570-UHPLCガードカラム
Discovery HS F5、2.1 mm x 100 mm、3 μmメルク567502-UHPLCカラム
蟻酸アルケム497-94318-50ミリリットル移動相添加剤
ガラスバイアルPerlan Technologies(パーラン・テクノロジーズ)〒5182-0714
HILIC Luna 3 μm、200A、100 x 2.0 mmシムポルPHX-00D-4449-B0HPLCカラム
HILIC SecurityGuard カートリッジ、3 μm、4 x 2.0 mmシムポルPHX-AJ0-8328HPLCガードカラム
イソプロパノールアルケム231-AL03262500HPLC溶媒
メタノールアルケム696-34966-4X2.5LHPLC溶媒
ナノピュアウォーターメルク1037281002HPLC溶媒
Q Exactive Focus 四重極-Orbitrap MS ハイブリッドサーモサイエンティフィックQ エクアクティブフォーカス質量分析計
SeQuant ZIC-cHILIC 3μm,100Å 100 x 2.1 mmメルク1506570001HPLCカラム
SeQuant ZIC-HILIC ガードキット 20 x 2.1 mmメルク1504360001HPLCガードカラム
SPME LCファイバープローブ、ミックスモードスペルコプロトタイプファイバー
UltiMate 3000 HPLCシステムサーモサイエンティフィックアルティメット3000HPLCシステム
バイアルインサート(非アクティブ化)Perlan Technologies(パーラン・テクノロジーズ)〒5181-8872
XSelect CSH C18 3.5μm 2.1x75mm186005644HPLCカラム
XSelect CSH C18 VanGuard カートリッジ 3.5μm, 2.1x5mm186007811HPLCガードカラム

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Solid Phase MicroextractionSPME ProbeMetabolite ExtractionGraft Tissue SamplingOrgan Quality AssessmentHydroalcoholic CleaningActivation SolutionDesorption SolutionLC MS AnalysisSterile Processing

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