瞬間凍結によるがんスフェロイドブロックの調製:凍結マトリックスブロック中のがんスフェロイドを保存する手順

この記事について

要約

このビデオでは、目的の組織サンプルを極低温に凍結し、マトリックス内のスフェロイドを拘束する技術である瞬間凍結によるがんスフェロイドブロックの調製を示しています。

プロトコル

1. 凍結組織切片のためのがんスフェロイドを含むサンプルブロックの調製

小さな鉗子を使用して、コラーゲンゲルとスフェロイドのブロックをチャンバースライドから慎重に持ち上げます。コラーゲンゲルブロックをプラスチック製の組織型に入れます。
コラーゲンゲルを1x PBSで短時間すすぎ、次にPBS中の4%パラホルムアルデヒド(PFA)で室温で30分間固定します
手記：PFAは発がん性物質の可能性があるため、取り扱いには注意が必要です。
コラーゲンゲルを1x PBSの1.5mLでシェーカーで15分間洗浄し、PBSを交換し、前の洗浄ステップを3回繰り返します。
最適な切断温度(OCT)コンパウンドの薄層(約3 mm)を塗布して、新しいプラスチック組織型の下部を覆います。固定して洗浄したコラーゲンゲルをOCTコンパウンドの上に置き、OCTコンパウンドに気泡が形成されないように、型にOCTコンパウンドを充填してゲル全体を慎重に埋め込みます。
型を4°Cで1時間放置します。
サンプルとOCT化合物を入れた型を、液体窒素上に浮かべた100mmのシャーレに置きます。サンプルを完全に瞬間凍結させます。
凍結したサンプルブロックは、将来の使用のために-80°Cで保管してください。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前	会社	カタログ番号
DMEM細胞培養液	サーモフィッシャーサイエンティフィック	11995065
ウシ胎児血清	サーモフィッシャーサイエンティフィック	26140079
抗生物質-抗真菌薬(100x)	サーモフィッシャーサイエンティフィック	15240062
ウシ血清アルブミン(BSA)	シグマ・アルドリッチ	A3803
リン酸緩衝生理食塩水(PBS)、 pH 7.4	サーモフィッシャーサイエンティフィック	10010023
ラットテール由来のコラーゲン1型、high 濃度	コーニング	354249
Nunc Lab-Tek II チャンバーカバーガラス	サーモフィッシャーサイエンティフィック	155382
パラホルムアルデヒド溶液	電子顕微鏡科学	15710
O.C.Tコンパウンド	サーモフィッシャーサイエンティフィック	23730571

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