マウスモデルにおける尿の枯渇と膀胱のすすぎ:マウスの膀胱を空にして洗浄するためのカテーテルベースの手順

要約

出典: Yu, C. et al. エレクトロポレーションによるマウス膀胱ウロセリウムへのプラスミドDNA送達の新規方法. J. Vis. Exp. (2018)

このビデオでは、マウスモデルの膀胱を空にしてすすぐカテーテルベースの手順について説明します。調製したマウスは、その後の実験手順に使用できます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.麻酔動物

1. 卓上麻酔システムを使用して、イソフルランで動物を麻酔します。O₂タンクの電源を入れ、酸素流量計を1 L / minに調整します。
2. 成体の女性用C57BL/6Jマウスを誘導チャンバーに入れます。イソフルラン気化器の電源を入れ、誘導のために3%に調整します。マウスは2分以内に麻酔下にあるべきである。ブプレノルフィン鎮痛薬(0.1mg / kg)を皮下投与し、マウスを誘導室から取り除いて先制鎮痛を行う
   手記：このプロトコルでは、尿道カテーテル法中に作業が容易な雌マウスが使用されます。このプロトコルは雄マウスにも有効ですが、特に注意が必要です。
3. 乾燥を防ぐために動物の目に眼科用軟膏を塗ります。麻酔をかけたマウスを上向きにして、鼻をノーズコーンに付けて加熱パッドに置きます。空気回路スイッチを回して、イソフルランがノーズコーンを通過するようにします。
4. 頭とノーズコーンを粘着テープで拘束します。メンテナンスのためにイソフルラン気化器を2%に調整します。
5. 粘着テープで手足を拘束します。つま先をつまむテストを実行して、動物が深い麻酔下にあることを確認してから、腹部を剃ります。

2. 尿の枯渇と膀胱のすすぎ

1. カテーテル(24G、長さ2.11cm、外径0.045cm)に潤滑剤を塗布し、その外面が完全に覆われていることを確認します。
2. カテーテルを尿道の開口部に挿入し、膀胱に到達するまでゆっくりと押し込みます。膀胱に達すると、尿がカテーテルから流れ出します。腹部をやさしく押して、尿の枯渇を助けます。
   1. 自動尿流出を観察して、カテーテルが膀胱に正しく挿入されているかどうかを確認します。尿道や膀胱壁に穴を開けないようにし、必要に応じて潤滑剤を複数回塗布してください。
3. ピペットで尿を廃棄物ビーカーに捨てます。
4. 80 μL のリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) をカテーテルの外側の端にピペットで挿入し、もう一方の端を膀胱に残します。1mLのシリンジをカテーテルに慎重に取り付けます。シリンジをそっと押して、PBSを膀胱に注入します。膀胱に気泡が生じないように、カテーテルにPBSをいくらか残しておきます。
5. シリンジを取り外します。PBSが膀胱から排出されるのを待ちます。腹部をそっと押してPBSを排出します。
6. カテーテルのPBSをピペットで廃棄物ビーカーに捨てます。
7. PBS洗浄(ステップ2.4〜2.6)をさらに2回繰り返します
   手記：これらの洗浄ステップでは、優しく作業することが不可欠です。カテーテル内の血液または液体の自動流出の失敗は、通常、尿道が貫通していることを示します

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
BD 1mL TB シリンジ	漁夫	148232E
Exel International ディスポーザブル Safelet I.V. カテーテル	フィッシャーサイエンティフィック	14-841-21	24G、長さ2.11cm、外径0.045cm
K&H小動物用ヒーテッドレストマット、9 x 12インチ	アマゾン		ヒートマットをペーパータオルで覆います
眼科用軟膏	漁夫	NC0849514
PBS、pH7.4	ライフテクノロジー	10010049
ピペットチップ 200 μL	USAサイエンティフィック	〒1111-0206
眼科用軟膏	漁夫	NC0849514
ピペットチップ、ユニバーサルフィット、0.1 〜 10 μL	漁夫	02707438(CS)
ブプレノルフィン	シグマ	B9275-50MG
ピペットマン NEO P2	ギルソン	F144561
ピペットマン NEO P200N	ギルソン	F144565
Therio-gel獣医用潤滑剤	PBSアニマルヘルス	353-736
V-1 テーブルトップシステム麻酔	ベトエキップ	901806
イソフルラン	獣医	501017
テープ、スコッチ	漁夫	19047257