方法論記事

拡張病理学:臨床組織サンプルの高解像度光学イメージング法

2023年4月30日

この記事について

要約

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

出典:Klimas, A. et al. 物理的および等方的拡大によるヒト組織切片のナノスコピックイメージング。J. Vis. Exp.(2019年)

このビデオでは、拡張顕微鏡法の一種である拡張病理学と呼ばれる方法について説明しています。この方法では、ナノスケールの構造を顕微鏡で観察するために、ポリマーネットワークを使用して臨床組織標本を化学的に膨張させます。

プロトコル

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 試料のin situ重合

  1. 試料を固定溶液でインキュベートします。
    1. AcXストック溶液を1x PBSで希釈し、非アルデヒド固定剤で固定したサンプルの場合は0.03 mg/mL、アルデヒド固定剤で固定したサンプルでは0.1 mg/mLに希釈して、アンカリング溶液(通常、組織切片を覆うのに十分)を調製します。これは、AcXと反応できる遊離アミンが少ないアルデヒド固定剤で固定されたサンプルの場合です。
    2. スライドを100mmのペトリ皿に入れ、固定液を組織の上にピペットで固定します。室温で少なくとも3時間、または4°Cで一晩インキュベートします。
  2. サンプルをゲル化溶液中でインキュベートします。
    1. 少なくとも100倍の余剰量のゲル化溶液を調製します。200 μLにつき、モノマー溶液188 μL、0.5% 4HT原液4 μL(1:50希釈、最終濃度0.01%)、10% TEMED原液4 μL(1:50希釈、最終濃度0.2%)、10% APS原液4 μL(1:50希釈、最終濃度0.2%)を順に組み合わせます。
      注:ゲル化溶液は使用直前に作る必要があります。溶液は4°Cに保ち、APS溶液は最後に添加して、早期のゲル化を防ぐ必要があります。
    2. ティッシュ切片から余分な溶液を取り除き、スライドを100mmのペ....

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

結果

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
図1:病理サンプル用のゲル化チャンバー (A) ダイヤモンドナイフでカットした#1.5カバーガラスの2枚などの2つのスペーサーを、サンプルを4°Cのゲル化溶液でインキュベートした後、組織の両側に配置します。スペーサーは、サンプルの圧縮を防ぐために、組織スライスよりも厚くする必要があります。(B)#1.5カバーガラスなどの蓋を使用して、37°Cでインキュベートする前にサンプルを覆います。

....

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

開示事項

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
利益相反は宣言されていません。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
6ウェルガラス底板(#1.5カバーガラス) セルビス P06-1.5H-N
アセトン フィッシャー・サイエンティフ A18-500
アクリルアミド シグマ・アルドリッチ A8887
アクリロイル-X SE、(AcX) インビトゲン A20770 (英語)
アガロース フィッシャー・サイエンティフ BP160-100
過硫酸アンモニウム(APS) シグマ・アルドリッチ A3678の イニシエータ
DAPI(1 mg / mL) サーモサイエンティフィック 62248 核の汚れ
ダイヤモンドナイフ No.88 CM 一般的なツール 31116
エタノール Pharmco(ファーマコ) 111000200
エチレンジアミン四酢酸(EDTA)0.5 M VWRの BDH7830-1
FFPE腎臓サンプル USBオマックス HuFPT072
鉗子
マイクロカバーガラス#1(24 mm x 60 mm) VWRの 48393 106
マイクロカバーガラス#1.5(24 mm x 60 mm) VWRの 48393 251
N、N、N'、N'-テトラメチルエチレンジアミン(TEMED) シグマ・アルドリッチ T9281 アクセル
N,N'-メチレンビスアクリルアミド シグマ・アルドリッチ M7279
Nunclon 6ウェル細胞培養ディッシュ サーモフィッシャー 140675
Nunc 15 mL コニカル サーモフィッシャー 339651
Nunc 50 mL コニカル サーモフィッシャー 339653
オービタルシェーカー
ペイントブラシ
pHメーター
リン酸緩衝生理食塩水(PBS)10x溶液 フィッシャー・サイエンティフ BP399-1
プラスチックシャーレ(100 mm) フィッシャー・サイエンティフ FB0875713
プロテイナーゼK(分子生物学グレード) サーモサイエンティフィック EO0491
カミソリの刃 フィッシャー・サイエンティフ 12640
Safelock 微量遠心チューブ 1.5 mL サーモフィッシャー 3457
Safelock 微量遠心チューブ 2.0 mL サーモフィッシャー 3459
アクリル酸ナトリウム シグマ・アルドリッチ 408220
塩化ナトリウム シグマ・アルドリッチ S6191
クエン酸ナトリウム三塩基性二水和物 シグマ・アルドリッチ C8532-1KG
トリスベース フィッシャー・サイエンティフ BP152-1
トリトンX-100 シグマ・アルドリッチ T8787
キシレン シグマ・アルドリッチ 214736
の の 名 名 の

再版と許可

このJoVE記事のテキストまたは図の再利用許可をリクエスト

許可をリクエスト

タグ

Expansion PathologyExpansion MicroscopyPolymer NetworkAnchoring SolutionGelling SolutionProteinase DigestionFluorescence ImagingTissue ExpansionConventional Light MicroscopyNanoscale Imaging

関連記事