外科的大槽注射:マウスモデルの中枢神経系に腫瘍細胞を直接投与する方法

要約

出典:Law, V. et al.軟髄膜疾患の直接標的療法を研究するためのマウスOmmaya異種移植モデル。J. Vis. Exp.(2021年)

この動画では、ヒト由来の腫瘍細胞をマウスの脳の大槽に送達する手順を説明しています。同所性マウスモデルを使用して、がんの頭蓋髄膜への転移性転移を研究することができます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. CTCの準備

1. 注射に必要なCTCの数を計算し、滅菌リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で1.0 × 10⁴細胞/μLのシングルセル懸濁液を調製します。細胞懸濁液を氷上または手順全体を通して4°Cに置きます.
   手記：トリプシン化が必要な細胞株を使用する場合は、必ず滅菌PBSで細胞を2回洗浄してトリプシンを除去してください。血球計算盤または自動セルカウンターを使用して細胞カウントを行います。大規模なコホート(>50匹のマウス)を使用する場合は、細胞を再カウントし、注射間の細胞生存率を検証して、マウスごとに一貫した数の細胞が投与されるようにします。

2. 術前処置

1. マウスに5 mg / kgのブプレノルフィン徐放性(Bup-SR)を皮下注射します。.
   手記：提案された切開部の領域を注入しないでください。肩甲骨から十分に離れた注射部位を選択してください。
2. マウスに2〜3%イソフルランを麻酔し、立ち直り反射の兆候がなくなるまで麻酔します。さらに、尻尾や足の挟み....

結果

図1:軟髄膜疾患と中枢神経系転移を研究するためのマウス異種移植モデルで循環腫瘍細胞を大槽に注入。(A)大槽の位置とCSFアクセス部位を示す図で、CTCはハミルトン注射器を使用して注入されます。(B)軟髄膜疾患を発症し、循環腫瘍細胞を2週間注射した後に中枢神経系転移(脳および脊髄に沿って)を発症したマウスの代表的なIVIS画像。細胞はルシフェラーゼレポーター遺伝子で標識されました。生理食塩水を注射した対照動物は腫瘍を発症せず(n=3)、実験を三重に行った。略語:CTCs =循環腫瘍細胞;IVIS = in vivoイメージングシステム。

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材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ビーズ滅菌器	Braintree Scientific Inc.(または任意のベンダー)	#GER 5287-120V	ジャーミネーター500
ブプレノルフィン徐放性(BUP-SR)	ズーファーム		DEA制御
ハミルトンマイクロリットルシリンジ	ハミルトン		10、25、50、100 μL; 大槽注射用 30G
リン酸緩衝生理食塩水(PBS)	任意のベンダー		0.1 mm 滅菌フィルター
げっ歯類手術器具(はさみ、鉗子)	Roboz Surgical Instrument(または任意のベンダー)
滅菌ブルーペーパー/ドレープカバー	任意のベンダー
滅菌綿スティック	任意のベンダー