ルシフェラーゼタグ付き神経膠腫幹細胞モデル:ルシフェラーゼタグ付き神経膠腫幹細胞をIn Vitro治療研究用に調製するためのレンチウイルス媒介法

要約

出典:Hu, Z. et al.患者由来神経膠腫幹細胞を用いたGBMの併用療法の可能性を特定するための迅速なスクリーニングワークフロー。J. Vis. Exp.(2021年)

このビデオは、レンチウイルスを介した遺伝子送達によるルシフェラーゼタグ付き神経膠腫幹細胞の確立を示しています。ルシフェラーゼはレポーター遺伝子として作用し、迅速な薬物スクリーニング実験を促進します。

プロトコル

1. Luciferaseタグ付きGSCの準備

1. GSCsの培養から始め、室温で70 x gで3分間遠心分離します。
2. 上清を取り除き、アキュターゼで細胞をアキュターゼで4分間37°Cで消化し、200μLのチップとピペットを繰り返し使用して細胞ペレットを解離し、再懸濁します。
3. 12ウェル培養プレートで細胞をウェルあたり2 x 10⁵細胞に希釈し、細胞を一晩培養します。
4. プレートの各ウェルに30 μLのルシフェラーゼ-EGFPウイルス上清(力価>^{10 8} TU /mL)を加え、1,000 x gで細胞を25°Cで2時間遠心分離します。
5. 翌日培地をリフレッシュし、細胞をさらに48時間培養します。
6. 蛍光顕微鏡で細胞を観察し、GFP陽性細胞の外観を確認します。
7. フローセルソーターを使用して、GFP蛍光の高いGSCを選別および選択し、細胞をさらに培養します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
B-27	ギブコ	17504-044	50倍
EGFの	ギブコ	PHG0313	20 ng/ml
FGFの	ギブコ	PHG0263	20 ng/ml
グルタマックス	ギブコ	35050061	100倍
神経基礎	ギブコ	21103049	1倍
ペニシリン-ストレプトマイシン	ハイクローン	SV30010	P:10,000ユニット/ ml S:10,000 ug / ml
ピルビン酸ナトリウム	ギブコ	2088876	100 mM