方法論記事

細胞外小胞抽出:示差遠心分離法を用いて全組織標本から細胞外小胞を単離する技術

2023年4月30日

この記事について

要約

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

出典:Hurwitz, S. N. et al.全組織からの細胞外小胞の抽出。J. Vis. Exp. (2019年)

このビデオでは、新鮮または凍結した組織から細胞外小胞を抽出する技術について説明しています。単離された細胞外小胞は、疾患の病因における重要な役割を明らかにするためのさらなる分析に使用できます。

プロトコル

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 組織解離と分画遠心分離

  1. 10 mLの解離バッファー(10 mgのパパイン、5.5 mM L-システイン、67 μM 2-メルカプトエタノール、1.1 mM EDTA)をHibernate-E培地で約0.4〜1.0 gの組織に調製します><。 注:EVの濃縮および精製に使用されるすべての溶液は、超純ろ過水で希釈する必要があります。
  2. 新鮮組織または凍結組織全体を50 mLコニカルチューブ内の解離バッファーに加え、37°Cの温水浴で20分間インキュベー
    3. トします。
  3. インキュベーション後、プロテアーゼ阻害剤とホスファターゼ阻害剤を添加して、組織を含む解離バッファーに最終1倍の濃度にします。
  4. 組織を含む溶液をルーズフィットのDounceホモジナイザーに注ぎ、サンプルあたり約30回のスローストロークを使用して組織を穏やかに解離します。ストロークの数は、組織の一貫性に基づいて調整できます。
  5. 緩衝液中の解離した組織を50 mLのコニカルチューブに移し、500 x gで4°Cで5分間遠心分離して、細胞と残りの繊維状または凝集性の組織断片をペレット
    6. 化します。
  6. 上清を清潔な50 mLコニカルチューブに移し、2,000 x gで4°Cで10分間遠心分離して、大きな細胞破片をペレット化して廃棄します。
  7. 上清....

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開示事項

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
利益相反は宣言されていません。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
0.45μmフィルター VWRの28145-505
12 mL超遠心チューブ ベックマン・コールター331372
5.5 mL 超遠心チューブ ベックマン・コールター344057
HALTホスファターゼ阻害剤(100倍溶液)サーモフィッシャーサイエンティフィック 78420
HALTプロテアーゼ阻害剤(100倍溶液) サーモフィッシャーサイエンティフィック78438
ハイバネイトEミディアムサーモフィッシャーサイエンティフィック A1247601
MLS-50 スイングバケットローター ベックマン・コールター367280
Optima MAX-XP 卓上型超遠心分離機 ベックマン・コールター393315

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タグ

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