マウスモデルにおける蛍光ガイド下腫瘍切除とMSCシード足場移植:マウスモデルにおける脳腫瘍切除腔内治療用間葉系幹細胞送達の外科的手技

要約

出典:Sheets, K. T. et al. Image-Guided Resection of Glioblastoma and Intracranial Implantation of Therapeutic Stem Cell-seeded Scaffolds.J. Vis. Exp. (2018年度)

このビデオでは、遺伝子操作された間葉系幹細胞または腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンドまたはTRAILを発現する遺伝子操作間葉系幹細胞またはMSCを播種したバイオスキャフォールドの画像誘導腫瘍切除および移植の外科的処置を紹介しています。これらの治療用MSCは、脳腫瘍の治療に可能性を秘めています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 蛍光ガイド下切除と足場移植

>注:手術を初期化する前に、すべてのツールを滅菌してください。

1. 定位固定装置フレームを蛍光解剖実体顕微鏡のステージに置きます。
2. 吸い込んだイソフルランを吸い込んだマウスを誘導室で麻酔します。麻酔をかけたら、イソフルランノーズコーンアダプターを介して継続的に吸入麻酔を供給して、マウスを定位固定フレームに固定します。加熱パッドおよび/またはプローブで体温を維持します.
   注:4〜5%のイソフルランは導入に適しており、2〜3%はメンテナンスに適していますが、これは各マウスに適合させ、監視する必要があります。
3. 角膜の乾燥を防ぐために、眼科用軟膏を目に塗ります。.頭皮の切開部位を一連の3つのアルコールワイプと3つのベタジンワイプで滅菌します。
4. 各肢でつま先ピンチ反射テストを行い、陰性反応を確認して適切な麻酔を確実にします。約55〜65呼吸/分で安定した呼吸数を確保します。
5. 鉗子を使って頭皮をつまんでそっと持ち上げます。手術用ハサミで正中線の線形吻側-尾側切開を行います。切開部位をPBSで洗浄し、綿の先端アプリケーターで円形のブラッシング動作で皮下脂肪を取り除きます。以前に確立された頭蓋窓が完全に見えるように皮膚を配置します。.
6. 18Gの針を使用して、頭蓋窓の境界のすぐ内側に硬膜をそっと穴を開けます。切開部が窓の内部を完全にトレースするまで繰り返します。
7. 硬膜を細い鉗子で剥がして取り除き、下にある実質と腫瘍を露出させます。
8. U87 mCh-Fl腫瘍の位置を特定するには、部屋の照明をオフにし、実体顕微鏡の蛍光モードをオンにします。切除の準備として、1〜200 μLのピペットチップを真空ポンプのチューブの端に装填します。
9. 真空ポンプをオンにします。シグナルが残らなくなるまで蛍光組織を穏やかに吸引することにより、腫瘍を切除します。真空ポンプの電源を切り、ピペットチップを廃棄します。蛍光を消し、部屋の照明を再び点灯させます。
   注:出血を抑えるには、冷たいPBSで洗浄し、綿の先端アプリケーターで一定の圧力をかけます。より重篤なケースでは、出血が止まった後に切除され、続いて別のPBS洗浄が行われる限り、切除腔を一時的に止血剤で詰めることもできます。
10. 移植の直前に、MSCシードPLA足場をPBSにゆっくりと浸して、不要な媒体と関連コンポーネントを取り除きます。足場を切除腔に移植します。必要に応じて、1 μL のフィブリノーゲン (67–106 mg/mL) と 1 μL のトロンビン (400–625 U/mL) を添加して、足場を所定の位置に固定します。
11. 硬膜を切除し、頭蓋窓の骨皮弁をすでに廃棄した状態で、皮膚を閉じて外科用接着剤を塗布するだけで傷口を密閉します。動物を吸入麻酔薬から取り出し、加熱された表面で回復させます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
マウス定位固定装置専用	ストールティング	51730	手術中も頭部の位置決めを安定させ続ける
蛍光解剖実体顕微鏡	ライカ	M165 FC	切除中の腫瘍のリアルタイムイメージングが可能
Vetbondティッシュ接着剤	3メートル	1469	皮膚の傷を閉じるための筋骨隆起の接着剤
人工涙液	アコーン	664268	手術中の目の乾燥を防ぎます
Webcolアルコールプレップ	コヴィディエン	6818	切開部位の滅菌
ベタジン手術用スクラブ	パデューフレディックカンパニー	6761815117	切開部位の滅菌
綿チップのアプリケーター	フィッシャーブランド	23-400-115	手術ツール
E-vac吸引システム	アルゴス	EV310	腫瘍の切除に使用される真空ポンプ
フィブリノーゲンとトロンビンは、受け取ったままのTISSEELから抽出されました	バクスター		足場を切除腔内に一時的に固定するには

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