蛍光分子断層撮影法:マウスモデルにおける蛍光タンパク質タグ付き神経膠芽腫異種移植片のIn vivoイメージングのためのイメージング技術

要約

出典: Benitez, J. A. et al., Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts. J. Vis. Exp. (2018)

このビデオでは、マウスモデルにおける蛍光タンパク質タグ付き膠芽腫異種移植片のin vivoイメージングのための蛍光分子断層撮影法またはFMTについて説明します。この技術は、抗腫瘍治療薬の効果を分子レベルで解明するのに有用です。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.FMTイメージング

>注:実験目的によれば、iRFPタグ付き膠芽腫細胞は、治療前、治療中、または治療後にin vivoで監視することができます。イメージング目的のために、イソフルラン誘導チャンバーを使用して動物に麻酔をかけ、スキャン中にイメージングカセットに保持し、FMTイメージャーのドッキングステーションでイメージングします。

1. 動物をケージから取り出し、イソフルラン誘導チャンバーに入れます。チャンバーを閉じ、酸素の流れと気化器を3〜5%にオンにします。
2. 動物が完全に麻酔されるまで、通常は1〜2分以内に動物を監視します。
3. 麻酔をかけた動物をチャンバーから取り出し、最初にヘッドアダプターを配置し、次に動物を下に向けて配置して、動物をイメージングカセットに入れます。ヘッドがカセットの中央にあることを確認してください。
4. カセットのトッププレートを上に置き、調整ノブを17mmまで締めます。
5. 動物がイメージングカセットに固定されたら、カセットをFMTイメージャーの内部ドッキングステーションに挿入してイメージングに進みます。そこでイソフルランがポンプで送られ、動物に麻酔をかけたままにします。
6. イメージャーとアナライザーのソフトウェアを実行するには、ソフトウェアのアイコンをダブルクリックします。
7. 「実験タブ」ウィンドウで、「データベース」と「研究グループ」を選択します。
8. 「スキャンタブ」ウィンドウに移動し、「被写体を選択」をクリックして画像化する被写体を選択します。また、「レーザーチャンネル」パネルでレーザーチャンネルを選択します。FP635標識細胞の場合は「レーザーチャネル635 nm」を、FP720標識細胞の場合は「レーザーチャネル680 nm」を選択します。
9. 「スキャンタブ」ウィンドウの「キャプチャ」オプションをクリックして、画像を取得します。次に、キャプチャされた画像のスキャンフィールドをクリックして、決定された数のソース位置(通常は同側側の20〜25ソース以内)にドラッグして、スキャンフィールドを調整します。
10. 「再構築キューに追加」オプションをオンにし、「スキャンタブ」ウィンドウで「スキャン」をクリックします。
11. スキャンが完了するまで待ってから、ドッキングステーションからイメージングカセットを取り外してください。
12. カセットのトッププレートを取り外し、動物をケージに戻します。
13. 残りの動物について、手順1.1〜1.12を繰り返します。

2. 画像解析

1. イメージャーおよびアナライザーソフトウェアから、「分析タブ」ウィンドウを選択します。
2. 「分析タブ」ウィンドウの「データセット選択」パネルにある「+」ボタンをクリックして、データセットと分析対象のロードを行います。
3. 画像が[分析]タブウィンドウに読み込まれたら、[分析]タブウィンドウの左上隅にある省略記号アイコンを選択して、関心領域(ROI)分析を実行します。
4. 「統計データ」パネルで「分析タブ」ウィンドウの「しきい値」列を右クリックして、しきい値をゼロに調整します。
5. 「統計データ」パネルの合計値は、マウスの脳に埋め込まれた蛍光タグ付き膠芽腫細胞からのシグナルを表しています。
6. 残りの動物についても、手順2.2〜2.4を繰り返します。新しい被写体の読み込みや削除は、「解析タブ」ウィンドウの「データセット選択」パネルで「+」または「-」ボタンをそれぞれクリックして行ってください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
蛍光トモグラフィーシステム	パーキンエルマー	FMT 2500 XL
TrueQuantイメージングソフトウェア	パーキン・エルマー	7005319
アチミックヌードマウス	チャールズリバー研究所	ひずみコード490(ホモ接合体)	Institutional による事前承認 アニマルケアプログラムとthe 機関バイオセーフティ委員会 必須。

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