マウス神経周囲浸潤モデル:マウス坐骨神経における神経周囲浸潤をシミュレートするためのIn vivoモデルの生成

要約

出典:Deborde, S. et al.神経周囲浸潤のインビボマウス坐骨神経モデル。J. Vis. Exp.(2018年)

この動画では、膵臓がん細胞を坐骨神経に注入することで、神経周囲浸潤のin vivoマウスモデルを開発しています。このモデルは、浸潤の程度を定量化し、がん細胞と神経の間の相互作用を研究するのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. マウスの作製と手術

注:この研究では、8週齢の雄と雌のC57BL / 6Jマウスを使用します。手術条件は、当施設のIACUC規則に従います。器具は滅菌され、手術用作業面は消毒され、動物は消毒され、外科医は滅菌手袋を着用します。

1. 手術の前日に、2%イソフルランを使用してマウスに麻酔をかけ、細いカミソリまたは化学脱毛剤のいずれかで背側の大腿骨の長さに沿って毛皮を取り除きます。
2. 手術当日は、誘導室で2%イソフルオランを使用してマウスに麻酔をかけます。つま先をつまむ刺激と反応の欠如によって麻酔を確認します。
3. 麻酔下での乾燥を防ぐために、目に獣医軟膏を塗ります。
4. 麻酔をかけたマウスを腹側に置き、各肢を低刺激性のテープで優しく固定して、注射する肢に軽度の張力を作り出します。麻酔は、精密な気化器とノーズコーンを介して供給されるイソフルランを使用して維持されます。
5. 注射部位をベタジンで洗浄し、次に70%アルコールで再度洗浄します。このプロセスをさらに 2 回繰り返します。手術野に抜け毛が残っていないことを確認してください。
6. 小さなハサミで約2mm下、大腿骨と平行に1cmの切開を行います。鉗子で皮膚を横方向に引っ込めて、下の筋肉を露出させます。
7. 坐骨神経は大殿筋と大腿二頭筋の筋肉に深く走っています。これらの2つの筋肉を筋膜面に沿って小さなハサミで分離し、その下の坐骨神経を露出させます。鈍的解剖を使用して、神経を周囲の筋肉から解放します。
8. ペレットから3μLのがん細胞(約50,000細胞)を10μLのシリンジに引き抜きます
   手記：または、コントロールとして3μLのPBSを引き出します。
9. 小さな金属ヘラを注射点の神経の下に置き、サポートします。解剖顕微鏡で視覚化しながら、針を金属ベースに対して神経に挿入し、挿入時に針を神経とできるだけ平行に保ちます。神経の奥に穴を開けないように注意してください。このプロセス全体を通して、神経の取り扱いをできるだけ最小限に抑えます。
10. 5秒かけてゆっくりと神経に注入します。注入領域に球根が形成されていることは、良好な注入を示しています。次に、針を3秒間そのままにしてから、針をそっと取り外します。針を3秒間所定の位置に保持すると、神経からの細胞の逆流が最小限に抑えられます.
    手記：注射は遠位神経または脊髄に向かって行うことができます。一連の実験内で一貫性を保つことが重要です。細胞が外部にこぼれた場合、その動物は実験の分析に含めるべきではありません。経験上、これらのイベントは非常にまれです。
11. 神経を元の位置に戻します。その上にある筋肉で神経を覆います。マウスを適切な鎮痛剤で治療し、5-0ナイロン縫合糸で皮膚を閉じます。
12. マウスを清潔なケージに一人で入れて観察し、麻酔から完全に目覚めるまで回復させます。
    手記：動物が完全に意識を取り戻すのに5〜15分かかります。動物は、胸骨の横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで、放置されません。動物は完全に回復するまで、他の動物と一緒に戻されません。その後、少なくとも 24 時間ごとに 1 回、72 時間回復を評価します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
鼠			実験の必要性に応じた数と年齢の変数
電気カミソリ	ヴァール	9962	市販の脱毛剤で代用可能
イソフルラン、250 mL	バクスター	1001936060
低刺激性サージカルテープ	3Mブレンダー	70200419342
ベタジンスワップスティック	PDIの	単位: 41350
Webcolアルコールプレップ	コヴィディエン	5110
滅菌手術器具(ハサミ・鉗子)
10 μL ハミルトンシリンジ	ハミルトン	80308
スチールマイクロヘラ	フィッシャーサイエンティフィック	S50823
解剖顕微鏡
ブピバシン、1 g	エンツォライフサイエンス	BML-NA139-0001	0.5%に再構成
5-0ナイロン縫合糸	エチコン	698時間

名 名