神経周囲浸潤またはPNIのマウス坐骨神経モデル:がん細胞による浸潤を理解するための坐骨神経の抽出と処理

要約

出典:Deborde, S. et al.神経周囲浸潤のインビボマウス坐骨神経モデル。J. Vis. Exp.(2018年)

この動画では、がん細胞を坐骨神経に注入して神経周囲浸潤のマウスモデルを確立する手順を説明します。このモデルは、その後の抗がん剤の評価のために神経浸潤の大きさを理解するのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 坐骨神経摘出

術

1. 以前に坐骨神経にがん細胞を注射したマウスを採取し、_CO2で安楽死させます。マウスを腹側に置き、ピンを使用して遠位肢を安定させます。
2. 注射した手足と胴体の背側の皮膚を取り除きます。
3. 鈍的解剖を使用して、坐骨神経を筋肉の奥深くに露出させます。
4. 神経は腸骨と仙骨の間を流れます。脊髄領域の神経にアクセスするには、2つの骨を分離します。まず、坐骨神経が位置する狭い部分に閉じたハサミを挿入し、次にマウスを握ったままハサミを開きます。繊細で、解剖中の坐骨神経の完全性を維持してください。
5. 大腿骨の端から遠位、脊髄の近位で坐骨神経を慎重に解剖します.
   手記：侵された神経は非常に壊れやすく、緊張や無理矢理な取り扱いで壊れやすいです。
6. 最初にその遠位端を切って神経を収穫します。神経を隣接する組織から解放しながら、神経を慎重に持ち上げます。脊柱からの出口にできるだけ近づいて、近位端で神経を切断します。
7. その後、バーニアキャリパーを使用して侵入の総長を記録します。この巨視的な推定はあくまでも目安です。

2. 神経の処理と定量化

1. 解剖した神経をOCTコンパウンドに埋め込みます。神経を縦方向に、できるだけ型の底に平らに配置するようにしてください。
2. カセットに神経の近位側と遠位側を、P(近位)とD(遠位)の文字をマークして示します。
3. 埋め込まれた神経をすぐに切片にしない場合は、ドライアイスの上に置きます。サンプルは-80°Cで数週間保存できました。
4. 厚さ5 μmのクライオスタットミクロトームを使用してサンプルを切片にし、切片をスライドガラス上に置きます。可能であれば、スライドごとに2つの神経セクションを取り付けます。神経の近位側を示します。
5. H&E染色を使用してスライドを染色します。
6. 高解像度のデジタルデータを提供するスライドスキャナーを使用して、汚れた神経切片をデジタルスキャンします。
7. イメージングソフトウェアを使用して、測定距離ボタン、侵入領域、またはその他の必要なパラメータをクリックして、侵入の長さを定量化します。浸潤の長さを適切に推定するには、同じ神経の複数のセクション(2〜4)を使用します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
鼠			実験の必要性に応じた数と年齢の変数
滅菌手術器具(ハサミ・鉗子)
Tissue-Tek O.C.T.コンパウンド	VWRの	25608から930
Tissue-Tek クライオモールド金型	VWRの	25608-916