成体マウスモデルからの口蓋組織の解剖:成体マウスの口腔から硬口蓋および軟口蓋を採取するための外科的処置

要約

出典: Xuan Ngo, Y. et al. Isolation and Culture of Primary Oral Keratinocytes from the Adult Mouse Palate. J. Vis. Exp.(2021年)

このビデオは、マウスモデルから口蓋組織を解剖する外科的処置を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

>1. 成体マウスの口蓋組織の解剖

1. 成体のC57BL/6Jマウス(雄または雌)を、動物福祉に関する施設の規則に従って子宮頸部脱臼により犠牲にしてください。
   1. 口の周りの毛をシェーバーで取り除きます。ハサミを使って、頬から顎に向かって両側を切ります。
      手記：犠牲の前にマウスに麻酔をかける必要があります。メデトミジン、ミダゾラム、およびブトルファノールの麻酔薬混合物が使用されます(材料の表を参照)。
2. 鉗子を使用して口を大きく開き、綿棒を使用して血液を吸収します。口蓋を消毒するには、10%のポビドンヨードを含む綿棒で口の中を拭きます。
3. マウスの口蓋を採取するには、まず、外科用メスの刃を使用して、上顎歯の口蓋側に沿って全層の辺縁切開を行います。次に、ラスパトリウムを使用して口蓋全体を慎重に解剖します.
   手記：ラスパトリウムは、粘膜骨膜フラップを浮き上がらせるために使用されるツールです(材料の表を参照)(図1B)。
4. 口蓋組織を、4 mLの完全培地+抗生物質-抗真菌溶液を含む15 mLチューブにすばやく移します。インキュベーションの準備ができるまで、組織を氷の上に置いておきます.
   手記：複数のマウスから採取する場合、口蓋組織を最大4時間氷上に保持できます。

結果

図1:マウス口腔ケラチノサイトの解剖手順と単離の概要(A)マウス口腔の概略図。(B)口蓋を解剖し、マウスの口腔ケラチノサイトを単離するために使用される器具。(C)マウスの口蓋の明視野画像。スケールバー:100μm.(D)プロトコールの要約。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
アイリスハサミ	室町機械	14090から09
メデトミジン	日本ぜんやく工業		ドミター
ミダゾラム	アステラス製薬		ドーミカム
No.15 使い捨てメス	羽	219AABZX00136000
ブトルファノール	明治精華ファルマ		ヴェトルファレ
半湾曲鉗子	BRCバイオ研究センター	PRI13-3376
ポビドンヨード	Y'sスクエア	872612
ラスパトリウム #14	一つとして	〒8-4599-01
細い鉗子	BRCバイオ研究センター	PRI13-3374
抗生物質-抗真菌薬100x	ギブコ	15240062
15 mL滅菌コニカルチューブ	隼	352096
綿	一つとして	63-1452-97
エピライフ・デファインド・グロース・サプリメント(EDGS)	ギブコ	S0120

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