心筋梗塞のマウスモデルの生成:マウスモデルにおける左前下行冠動脈の永久結紮術の外科的手技

要約

出典:Lugrin, J. et al.左前下行冠動脈の永久結紮を使用したマウス心筋梗塞モデル。J. Vis. Exp.(2019年)

このビデオでは、左前下行冠動脈を永久結紮することにより、心筋梗塞のマウスモデルを生成する外科的処置について説明します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 麻酔と気管カニューレ挿入

1. マウスの体重を量り、麻酔薬、術後鎮痛薬、人工呼吸器の一回換気量の投与量を決定します。加熱パッドを37°Cに予温します。手術のセットアップを図1に示します。
2. ケタミンとキシラジンの混合物をそれぞれ80 mg / kgおよび10 mg / kgの用量でマウス腹腔内注射します。.
3. 電気カミソリを使用して、喉と胸郭の左側のマウスの毛皮をすばやく剃ります。
4. 尾や後ろ足をつまんで麻酔の深さを確認し、動物を加熱パッドの仰臥位に落ち着かせます。目の過熱を避けるために、動物の頭の下に小さなガーゼの湿布を置きます。目の乾燥を避けるために眼ジェルを塗布します。.
5. ヒーティングパッドの表面に4本の手足を粘着テープで固定します。上切歯の下に5-0シルク縫合糸のループを通し、ループの先端を粘着テープで加熱パッドに貼り付けます。これにより、動物の口が開いたままになり、カニューレ挿入が容易になります。
6. 剃毛済みの部分に脱毛クリームを塗り、綿棒で1分間優しくマッサージし、余分な毛皮とクリームをガーゼで拭き取ります。0.9%生理食塩水とガーゼを滴下して、切開部を清掃します。剃った喉と胸部に滅菌ガーゼを塗り、ヨードポビドンに浸します.
   手記：切開部位には局所麻酔薬(リドカインまたはブピバカイン)の適用をお勧めします。
7. 換気装置を一回換気量7mL / kg、換気速度140ストローク/分に設定します><。 手記：これからは、顕微鏡手術実体顕微鏡の下で働きましょう。
8. 喉の中央に皮膚を持ち、小さなハサミを使用して尾側/頭側線に沿って0.5cmの切開を行います。唾液腺の葉を分離し、次に湾曲した解剖鉗子で胸骨舌骨筋の筋膜を静かに分離し、喉頭と気管が見えるまで行います。開口部の端をゴムバンドに取り付けられたリトラクターで固定します.
   手記：筋肉を切開せずにこの手順を行います。訓練を受けたオペレーターは、気管を視覚化することなく、口腔を介して動物に挿管することができ、この手順はオプションになります。
9. 舌を横に優しく持ちます。鉗子を使用して、16Gカニューレの鈍い内側の針を気管に挿入します。喉の切開部から気管に正しく挿入されることを視覚化します。
10. カニューレをベンチレーターに接続し、排気チューブを水に入れて正しい換気を確保します。気泡の存在は、正しい挿管を示しています.
    手記：手術中に組織を濡らさないように、0.9%生理食塩水とヨードポビドンを浸した滅菌ガーゼを喉切開部に置きます。施術中の水分をコントロールしてください。

2. LAD冠状動脈の結紮

1. ダクトテープから左前足を離し、マウスを慎重に右側の褥瘡の位置に移動します。動物が正しい位置に着いたら、左前肢を固定します。
2. 左大胸筋と大筋の間の線を特定し、線に沿ってハサミで1cmに斜めの皮膚切開を行います。鈍いマイクロハサミを解剖すると、切開せずに胸筋の筋膜を分離します。胸筋を伸縮バンドに取り付けられたリトラクターで分離した状態に保ちます。
3. 人工呼吸器を呼気終末陽圧(PEEP)3 cm H₂Oに設定します。
4. 第3肋骨と第4肋骨の間の第3肋間腔にある鈍い鉗子を使用して胸腔を開きます。内胸動脈には出血の危険がありますので、触れないでください。心臓や肺には触れないでください。リトラクターを各リブに1つずつ、胸郭に1つずつ取り付けます(図2A)。
5. 湾曲した細い鉗子で、心膜を慎重に取り外し、心臓や肺を傷つけずに引き離します。
6. 左前下行(LAD)冠状動脈を見つけます。LAD動脈は、左耳介の端から頂点に向かって走る表面の明るい赤い線として現れます。
7. ニードルホルダーを使用して、左心房の2〜3 mm下のLADの下に7-0シルク縫合糸を通します。心臓組織の破れを避けるために、ゆっくりと絹を引っ張ります。結紮糸を3つの結び目で結びます。左心室の左下部分は、結紮するとすぐに青白くなります(図2B–E).
   手記：心室腔に深く入りすぎたり、表面的になりすぎたりしないことが重要です。偽手術の動物の場合は、LADの下に縫合糸の絹を引っ張り、組織の裂け目を避けてゆっくりと取り外します。
8. リブリトラクターを放し、鉗子で3番目の肋骨を保持し、3番目と4番目の肋骨の下に6-0シルク縫合糸で2回パスします
   注意：心臓や肺に穴を開けないでください。まだ結び目を締めないでください。
9. 開口部に37°Cの0.9%生理食塩水を3滴垂らし、呼気排気管を2〜3回の呼吸サイクルで閉じて、肺を適切に膨らませます。縫合糸を締め、2回のスローで固定します。
10. 筋肉を保持しているリトラクターを離し、正しい位置を取り戻すのを助けます。
11. 5-0縫合糸シルクの2針で胸部の皮膚を閉じ、2回のスローで固定します。5-0縫合糸シルクの1針で喉の皮膚を閉じ、2回のスローで固定します。

結果

図1:手術セットアップの説明 (A)手術セットアップは、改良された加熱パッド、人工呼吸器、および弾性バンドに取り付けられたリトラクターで構成されています。(B)手術中に使用されるハサミ、鉗子、ニードルホルダーのセット。(C)ミニリトラクターのクローズアップ。表示されていません:手術用実体顕微鏡。

図2:...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
30Gニードル	BDマイクロランス3	304000
ブラントレトラクター	ファインサイエンスツール	18200-09
綿棒	Applimed SAの	6001109
解剖ハサミ、湾曲	エイスクラップ	BC603Rの
電気カミソリ	レミントン	HC720
脱毛クリーム、野菜	シルク&フレッシュテック。	8218535
マイクロハサミ、湾曲鈍/鈍	エイスクラップ	FM013Rの
1 CC シリンジ、Omnifix-F	B.ブラウン	9161406V
シルク縫合糸5-0、BB	エチコン	K880Hの
シルク縫合糸6-0、P-1	エチコン	639H
シルク縫合糸7-0、BV-1	エチコン	K804
学生デュモン#7鉗子	ファインサイエンスツール	91197から00
学生用細い鉗子、角度付き	ファインサイエンスツール	91110から10
サージカルグローブ	ワイタカレ	834301
外科用温熱パッド	パーソナライズされた設定
テムゲシックゾル0.3 mg / mLブプレノルフィン	インディビオール・シュヴァイツAG	N02AE01
16Gの静脈内猫の気管チューブインナーニードル	アボカト-T	G714-A01
ユニバーサルS3顕微鏡、OMPIMD	ゼイズ
ベンチレーター、MiniVentモデル845	ハーバード大学装置	〒73-0043
ビスコティアーズ	アルコン	1551535
70%エタノール
ベタジン60mL	ムンディファーマ

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