運動性熱中症マウスモデル:運動性熱中症の根底にあるメカニズムを研究するためのプロトコル

要約

出典:King, M. A. et al.マウスの労作性熱中症の前臨床モデル。J. Vis. Exp.(2021年)。

このビデオでは、マウスモデルで労作性熱中症(EHS)を研究するためのステップバイステップのプロトコルについて説明します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. EHSプロトコル

1. EHSプロトコルの前夜、マウスを室温(~25°C、相対湿度≈30%)の環境チャンバーに入れて、チャンバーに順応させます。
2. データ収集システムを使用して、一晩で30秒間隔で平均された連続コア温度(Tc)を収集します。
3. EHSプロトコルの朝、マウスが日周温度の正常範囲以下にあることを確認してから、チャンバー温度(つまり、36〜37.5°C)を上げます。これにより、マウスが発熱したり、この期間中に過度のストレスを感じたりすることはありません。
4. マウスが安定し、通常の安静時深部体温の範囲内に入ったら、餌と水を取り除き、動物の体重を量ります。チャンバーのドアを閉め、チャンバーの温度を37.5°C、相対湿度40%〜50%、または希望の環境温度と湿度の目標に上げます。校正済みの温度と湿度のモニターでチャンバーの温度と湿度を確認します。
5. 議定書中の光と乱れを最小限に抑えるために、チャンバーを遮光カーテンで囲みます。プロトコル中は、リモートIR照明付きカメラを介してマウスを連続的に監視します。2台目のカメラを、走行中のホイールの近くに設置した温度および湿度モニターに合わせます。環境チャンバーの設定値のコントローラーを調整して、動物の近くの温度を正確に読み取るようにします。
6. 温度モニターの 2 台目のカメラで測定した目標温度にチャンバーが到達したら (これには ~30 分かかる場合があります)、チャンバーのドアをすばやく開き、マウスを強制走行ホイールに置きます。
7. 強制走行ホイールプロトコルを2.5 m/minの速度で開始し、マウスがTcが41°Cに達するまで10分ごとに速度を0.3 m/min上げます。マウスがこのコア温度に達したら、明らかな意識喪失、後方への転倒または失神、および走り続けることやホイールにしがみつくことを特徴とする症状の制限まで、速度を一定に保ちます。マウスがホイール上で3回後方に回転し、物理的な反応の兆候がない場合、この時点を確認します。あるいは、地域のIACUCルールに従って人道的なエンドポイントを特定し、プロトコルをいつ停止するかを決定します(例:Tc ~43 °Cの場合)。このエンドポイントは、基本的にすべてのマウスで症状の制限をわずかに上回っています。
8. 急速冷却プロトコル(R)を実行するには、マウスが症状の制限に達したら、ホイールを停止し、すぐに強制走行ホイールから取り外します。マウスの重量を量り、ホームケージに戻して室温で回復します。この間、チャンバーのドアを開けたままにし、インキュベーターの設定値を室温に戻して、チャンバーを急速に冷却します。この手順により、>99%の長期生存率が得られます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
1080P HD 4防犯カメラ4CHホームビデオ防犯カメラシステム(1TB HDD 2MPナイトビューカメラ付き)CCTV監視キット	ラビュー
BK Precision マルチレンジ プログラマブル DC 電源 モデル 9201	BKプレシジョン
レイファイエット電動ホイールモデル #80840B	レイファイエット
科学環境チャンバーモデル3911	サーモフォルマ
補助輪	コロンバス研究所
エナジャイザー電源	スターライフサイエンス
G2 エミッタ他	スターライフサイエンス
プラットフォームレシーバー他	スターライフサイエンス