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動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。
1. EHSプロトコル
- EHSプロトコルの前夜、マウスを室温(~25°C、相対湿度≈30%)の環境チャンバーに入れて、チャンバーに順応させます。
- データ収集システムを使用して、一晩で30秒間隔で平均された連続コア温度(Tc)を収集します。
- EHSプロトコルの朝、マウスが日周温度の正常範囲以下にあることを確認してから、チャンバー温度(つまり、36〜37.5°C)を上げます。これにより、マウスが発熱したり、この期間中に過度のストレスを感じたりすることはありません。
- マウスが安定し、通常の安静時深部体温の範囲内に入ったら、餌と水を取り除き、動物の体重を量ります。チャンバーのドアを閉め、チャンバーの温度を37.5°C、相対湿度40%〜50%、または希望の環境温度と湿度の目標に上げます。校正済みの温度と湿度のモニターでチャンバーの温度と湿度を確認します。
- 議定書中の光と乱れを最小限に抑えるために、チャンバーを遮光カーテンで囲みます。プロトコル中は、リモートIR照明付きカメラを介してマウスを連続的に監視します。2台目のカメラを、走行中のホイールの近くに設置した温度および湿度モニターに合わせます。環境チャンバーの設定値のコントローラーを調整して、動物の近くの温度を正確に読み取るようにします。
- 温度モニターの 2 台目のカメラで測定した目標温度にチャンバーが到達したら (これには ~30 分かかる場合があります)、チャンバーのドアをすばやく開き、マウスを強制走行ホイールに置きます。
- 強制走行ホイールプロトコルを2.5 m/minの速度で開始し、マウスがTcが41°Cに達するまで10分ごとに速度を0.3 m/min上げます。マウスがこのコア温度に達したら、明らかな意識喪失、後方への転倒または失神、および走り続けることやホイールにしがみつくことを特徴とする症状の制限まで、速度を一定に保ちます。マウスがホイール上で3回後方に回転し、物理的な反応の兆候がない場合、この時点を確認します。あるいは、地域のIACUCルールに従って人道的なエンドポイントを特定し、プロトコルをいつ停止するかを決定します(例:Tc ~43 °Cの場合)。このエンドポイントは、基本的にすべてのマウスで症状の制限をわずかに上回っています。
- 急速冷却プロトコル(R)を実行するには、マウスが症状の制限に達したら、ホイールを停止し、すぐに強制走行ホイールから取り外します。マウスの重量を量り、ホームケージに戻して室温で回復します。この間、チャンバーのドアを開けたままにし、インキュベーターの設定値を室温に戻して、チャンバーを急速に冷却します。この手順により、>99%の長期生存率が得られます。