急性胆道膵炎モデル:膵管注入による急性胆道膵炎マウスモデルの生成方法

要約

出典:Serra, M. B. et al.タウロコール酸ナトリウムは、C57BL/6マウスにおいて重度の急性膵炎を誘発しました。J. Vis. Exp.(2021年)

このビデオでは、タウロコール酸ナトリウムの膵臓注入による急性胆道性膵炎のマウスモデルの生成手順について説明しています。このモデルは、膵臓のタウロコール酸ナトリウムによって誘発される病態生理学的変化を研究するのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 開腹術

1. キシラジン(10 mg / kg)とケタミン溶液(80 mg / kg)で動物を皮下(0.1 mL / 10 g体重)で麻酔し、1 mLの注射器と13 x 0.45 mm針26 G 1/2を使用して動物を麻酔します。つま先をつまんで、十分な麻酔の深さを確認します。加熱パッドを使用して体温を制御します。すべての手術材料が無菌であることを確認してください。
2. 腹部を5%ポビドンヨード溶液で洗浄し、トリマーを使用して胸部と下腹部(約2 cm²)の間の毛を取り除きます。手術部位を70%アルコールで洗浄します。
3. サージカルテープを使用して動物をサージカルボードに固定します。はさみを使用して、腹部の上部と剣状突起の1cm下で、皮膚の5 mmを水平に切ります。腹膜でカットを繰り返します。これにより、空洞の露出を最小限に抑えた開腹術が行われます。

2. 膵臓の位置特定と露出

1. リトラクターを使用して、肝臓を腸から~1cmのマウスの頭に向かって引きます。
2. タウロコール酸ナトリウム(膵臓の頭部)を注入する膵臓の領域を特定します。肝臓を参照して十二指腸を見つけます—肝臓の下、右側(マウスが表示されている左側)にあります。十二指腸は小腸の最初の部分であり、胃の最後の部分に接続されています。
3. 鉗子の助けを借りて、肝臓を動物の頭に向かって持ち上げ、小腸部分をそっと引っ張ります。小腸の2つの側端を6-0ポリプロピレン縫合糸で固定して、総胆管の遠位部分がよく見えるようにします。

3. 重症急性膵炎誘発

1. 近位総胆管をマイクロベッセルクリップで一時的に閉塞し、逆行性注入が肝臓に漏れるのを防ぎます。.総胆管は十二指腸の肝臓側に見られ、十二指腸との接合部は白く見えます。臓器を腹腔外に露出させます。
2. 0.54 mmのポリエチレンチューブに接続された0.4 mmの針で総胆管にアクセスするために、膨大部周囲領域(小腸壁の白っぽい部分)を穿刺します。
3. 8-0で遠位総胆管を一時的に閉塞させますタウロコール酸ナトリウム溶液が十二指腸に漏れるのを防ぐための縫合糸。
4. 輸液ポンプを始動し、2.5%タウロコール酸ナトリウム溶液(0.9%生理食塩水で希釈)を10μL / 10 g体重の一定速度で3分間注入するようにプログラムします。.
5. 注入後、マイクロベッセルクリップ、一時的な8-0を取り外します縫合糸は、胆汁膵管からの注射針により胆汁の生理的流れを再構成する。
6. 最後に、6-0非吸収性モノフィラメントポリプロピレン縫合糸で腹部を縫合します。開腹術から末端縫合までの時間は最大30分である必要があります(図1を参照)。
7. 手術後、木の削りくずと水と食べ物が並ぶポリエチレンの箱に動物を収容します。
8. 対照マウスは実験マウスと同じ方法で扱いますが、注入液が生理食塩水のみで構成されていることを確認してください。手術とカニューレ挿入によって引き起こされる炎症性バイアスを排除するために、対照群(SHAM)で外科的処置と生理食塩水の注入(10 mL /分、3分間)を行います。
9. トラマドール12.5 mg / kgを8時間ごとに皮下投与します。術後の回復後から。.

結果

図1:C57BL/6マウスにおける2.5%タウロコール酸ナトリウムによる重症急性膵炎誘発の概略図。(B)総胆管;(C)膵管;(D)門脈;(e)マイクロベッセルクリップ;(f)穿刺部位(ポリエチレンチューブに取り付けられ、輸液ポンプに接続された針);(G)総胆管への一時的な針の固定。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
0.4mm針	イントラグメディカルテック	90183210	30グラム
0.54mmポリエチレンチューブ	タイゴン	730010
発泡スチロールブロック
マウスを取り付けるためのマスキングテープ	ミスナー	1236
輸液ポンプは10μL / minを予定しています。	Havard aparatus-蠕動ポンプシリーズ	MA1 55-7766	モデル66 スモール・ペリスタルティック
はさみと鉗子
防腐剤プロビジンヨウ素	ファイザー	12086または	消毒
70%エタノール	シグマ	459836	700 mL 100% エタノールと 300 mL dH2O を混合
カミソリの刃	主	BDK9A1GHK6	トリコトミーの場合
タウロコール酸ナトリウム	シグマ・アルドリッチ	86339から1G	CAS番号 - 345909-26-4
マイクロベッセルクリップ	メディコンサージカル	56.87.35	近似器、開口4.0 mm、閉圧30-40 g
6-0 プロレン	バイオライン	5162	縫合線
ケタミンNP(クロリドラト・デ・デキストロセタミナ)50mg / mL	クリスタリア
キシラジン2%	シンテック
滅菌生理食塩水(0.9%(wt/vol)生理食塩水)	ファーマス	105851
メチルブルー	シグマ・アルドリッチ・ケミカルズ	M5528
デスマレスリトラクター 13mm幅	ロボズ	RS-6672