マウスモデルにおける横方向大動脈弓バンディング:左心室における高圧誘導のためのマウスにおける低侵襲技術

要約

出典:Zaw, A. M. et al.マウスの低侵襲横行大動脈狭窄。J. Vis. Exp.(2017年)

このビデオでは、圧力過負荷による心不全を調べるために、マウスの低侵襲横行大動脈狭窄の実験プロトコルを示します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 運用現場の準備

1. 手術部位を75%イソプロピルアルコールで消毒します。対象動物の心拍数と呼吸数の変化を避けるために、加熱パッドの温度を37°Cに調整します。
2. 重力置換滅菌器で121°Cで30分間滅菌した手術器具を使用するか、他の適切な方法で滅菌してください。
3. 図1に示すように、2〜4本の30ゲージ針をニードルホルダーで曲げて、ライゲーションと組織分離、およびリトラクターとして使用するためのツールを作成します。湾曲した針を綿のアプリケーターに取り付けて、手術に使用します。
4. 27ゲージの針を鈍くし、ニードルホルダーで90°湾曲させます。ライゲーションステップで硬い表面をこすり、0.4mmのスペーサーを作ることで先端を滑らかにします。

2. 動物の調理法

1. 生後2か月、雄、22〜25 g C57BL / 6Nマウスに、体重に関連して適切なケタミンとキシラジンの混合物を麻酔します:100 mg / kg + 10 mg / kg i.p.ネガティブテールピンチ反射で麻酔を確認します。
2. 脱毛クリームを2〜3分間塗布して、首と胸の前部の毛を取り除きます。ぬるま湯と綿のアプリケーターでクリームを取り除きます。
3. 角膜の乾燥を防ぐために、動物の目に眼科用軟膏またはジェルを塗布します。
4. 動物を仰臥位の温熱パッドに置き、術中モニタリングを行い、15分間隔ごとに適切な文書を保管してください。
5. 手術中に動物を正しい位置に保つために、手術用紙テープを使用して手足を加熱パッドに固定します。
6. アルコールとポビドンヨード溶液で交互に皮膚を3回消毒します。
7. 汚染を防ぐために、操作フィールドが露出した滅菌ドレープを使用してください。各マウスに、必要に応じて新しい滅菌手袋を使用してください。

3. ライゲーション手順

1. メスで首と胸の正中線位置でマウスの皮膚を開きます。
2. 鈍いハサミで結合組織を穏やかに分離することにより、甲状腺を頭に向かって引きます。
3. 湾曲した針で両側に向かって正中線で気管の筋肉層を分離します。
4. 鈍いハサミを使用して、胸骨を2番目の肋骨(約5 mm)に切ります。リトラクターまたは湾曲した鉗子でカットを開きます。
5. 湾曲した針で結合組織を分離することにより、胸腺葉を互いに分離し、胸壁下部を分離します。この時点で、横行大動脈弓と2つの頸動脈がはっきりと見えます。
6. 湾曲した針をアーチの下に置き、湾曲したヘッドを押し出すことにより、血管壁と反対側の結合組織との間に穿孔します。
7. 湾曲した針を使用して、大動脈弓の下の6-0モノフィラメント縫合糸を引っ張ります。
8. スペーサーをループに置き、縫合糸をダブルノットで固定します。スペーサーをそっと取り外します。
9. 結び目の位置で収縮が成功したことを確認し、縫合糸の端を切断します。
10. 6/0シルク縫合糸を使用して胸壁を閉じ、単純な中断縫合パターンを使用します。6/0モノフィラメント縫合糸で連続縫合パターンで皮膚を閉じます。

4. 術後のケア

1. ポビドンヨード溶液を縫合部位に塗布し、回復と術後のモニタリングのために動物を事前に温めたケージに入れます。
2. 動物が意識を取り戻した後、ブプレノルフィン(0.05〜0.1 mg / kg s.c.)を12時間ごとに注射して痛みを和らげ、マウスに適切な柔らかい食物を提供します。.
3. 完全に回復した後、動物を12時間の明るい/暗いサイクルルームに戻します。

結果

図1:1インチ、30ゲージの針先を曲げて目的の針フックを形成するプロセス。(A)元の1インチ、30ゲージの針先。(B)針先を針ホルダーでつかみ、その長さの約半分まで曲げます。必要に応じて針ホルダーと手を使って針をループ状に曲げ、図の右上に描かれたループを形成します。(C)曲げたセグメントを所定の位置に保持するために、針をポリウレタンチューブで覆います。(D)ニードルホルダーを使用して、ループの先端を希望の形状に曲げます。この場合、説明のために、2つの45〜60°の曲がりを持つ針先が示されています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
1インチ30ゲージニードル	BD, Franklin Lakes, NJ 07417 アメリカ合衆国	305128	手順および図1のように湾曲
27ゲージニードル	BD, Franklin Lakes, NJ 07417 アメリカ合衆国	301629	スペーサーのために鈍く滑らかにする
6/0 ダフィロン	B. Braun, 34212 Melsungen, ヘッセン州, ドイツ	C0933066
6/0 シルカム	B. Braun, 34212 Melsungen, ヘッセン州, ドイツ	C0762067
滅菌手袋	A.R. Medicom, Inc (Asia) 香港
コットンアプリケーター	マニングス、クオリーベイ、香港		地元のショッピングセンター
脱毛クリーム	Veet (Hong Kong), Kwun Tong, 九龍, 香港		地元のショッピングセンター
レクサーベビーシザー	FST, ブリティッシュコロンビア州 V7H 0A6 カナダ	14078-10
湾曲した虹彩鉗子	FST, ブリティッシュコロンビア州 V7H 0A6 カナダ	11065から07
マイクロオルセンヘガーニードルホルダー	WPI, Sarasota, FL 34240 アメリカ合衆国	501989
実体顕微鏡	WPI, Sarasota, FL 34240 アメリカ合衆国	PZMIII-BS
ジェンティール アイジェル	ノバルティス、イーストハノーバー、ニュージャージー州07936、米国		地元の薬局
ヒーティングパッド	Kent Scientific Corporation, Torrington, CT 06790 アメリカ合衆国	DCT-20
サージカルテープ	実験動物ユニット
ケタミンとキシラジン	実験動物ユニット
ベタジン	実験動物ユニット
ブプレノルフィン	実験動物ユニット

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