新生児マウス卵巣分離:新生児マウスモデルから卵巣のペアを採取するための外科的処置

要約

出典:et al. Morgan, S. マウス卵巣と卵巣卵胞の培養と共培養.J. Vis. Exp.(2015年)。

このビデオでは、新生児マウスから卵巣を分離する外科的処置について説明します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

>1. 新生児卵巣解剖と培養

1. 1 mLの解剖培地(3 mg/mL BSAをLeibowitz L15培地に溶解し、0.2 μmの細孔、直径25 mmのフィルターでろ過滅菌)を各滅菌ガラス胚皿に入れます。
2. 生後0日目から5日目の間に年齢を重ねた新生児マウスの子犬を淘汰し、斬首して淘汰します。
3. 一対の細かい解剖鉗子を使用して腹壁を覆っている皮膚をつかみ、皮膚と体壁に大きな切開を行います。切開部を引っ張って開き、腹部全体が露出するようにします。膀胱は通常、この段階で充血し、解剖を容易にするために穿刺することができます。
4. 時計メーカーの鉗子を使用して、腸を邪魔にならないように動かします。膀胱から両側の腎臓まで子宮角をたどります。卵巣は子宮の上部にある腎臓のすぐ下にあり、解剖顕微鏡の下では雲のような構造として現れます。
5. 時計メーカーの鉗子で卵巣をやさしくつかみ、はさみを使って子宮への付着を切断します。卵巣のペアを、予め温めた解剖培地を含む胚皿に移します。
6. 加熱ステージ(37°C)の解剖顕微鏡下で卵巣の微細解剖を行います。インスリン針を使用して、滑液包嚢と卵管を含む余分な物質を切り取り、卵巣だけが残るまでします。
7. 細かく引き抜かれた湾曲したガラスピペットを使用して、各卵巣を培養プレートのウェルに移します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
レイボウィッツL15	インビトゲン	11415049
αMEM	インビトゲン	22571020	重炭酸ナトリウム緩衝剤(2,200 mg / L)として供給
ウシ血清アルブミン	シグマ・アルドリッチ	A9418の	解剖媒体用
ウシ血清アルブミン	シグマ・アルドリッチ	A3311	培地用
ウシ血清アルブミン	シグマ・アルドリッチ	A2153の	ガラスピペットのコーティング用
FSHの	メルク・セローノ	ゴナルF	バッチテストはしばしば必要になります。1IU/10μLの原液をαMEMに溶かし、-20°Cで保存
シリンジフィルター(25 mm、0.2 μm)	グライナー	16532K 閲覧数	より大きな(>5 mL)量の培地をろ過するための酢酸セルロースフィルター。
滅菌チューブ	グライナー	187261
24ウェルプレート	グライナー	662160
インスリン針	BD医療用品	〒037-7606	0.33 mm (29 G) + 1 mL
ガラス胚皿	VWRの	〒720-0579	滅菌してから温めてから使用してください
ガラスピペット	フィッシャーサイエンティフィック	10209381	使用前にBSAコーティング
鍼灸	アキュメディック株式会社	30 mm x 0.25 タイプC
ホルマリン溶液、中性緩衝液、10%	シグマ・アルドリッチ	HT5014-120mL
Whatmanヌクレオポアメンブレン	カムラブ	WN/110414	光沢のある表面を上にして、ポリカーボネート、直径13mm、孔径8.0μmを使用

型 します。