マウスモデルにおける光血栓性脳卒中のモデリング:光血栓症を誘発するための感光性色素投与後のマウス頭蓋骨を介したレーザー照明技術

要約

出典: Llovera, G. et al. Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis. J. Vis. Exp. (2021)

このビデオは、感光性色素の投与後に無傷の頭蓋骨をレーザー照射することにより、マウスモデルで光血栓性脳卒中を生成する手順を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 動物の準備

1. 手術の30分前に鎮痛剤を注射します(4 mg / kgカルプロフェンと0.1 mg / kgブプレノルフィン)。
2. マウスの体重を記録して、注射するローズベンガルの用量を調整します(10μL / g、つまり100μg / g)。
3. マウスをイソフルラン流量4%の誘導チャンバーに入れて、体と振動の自発的な動きが止まるまで麻酔をかけます。
4. マウスを定位フレームに移し、鼻を麻酔マスクに入れて腹臥位に置きます。動物を固定し、イソフルラン濃度を4%に1分間維持します。その後、イソフルラン濃度を2%に下げて維持します。
5. 直腸プローブをそっと挿入して、外科的処置全体の温度を監視します。マウスの体温を37°Cに維持するように、関連するフィードバック制御加熱パッドを設定します。
6. デクスパンテノール眼軟膏を両目に塗布し、消毒剤で皮膚と周囲の毛皮をきれいにします。.

2. 光血栓症モデル

1. 縦方向に2.0〜2.5cmの切開を行い、引っ込めて頭蓋骨を露出させます。傷の合併症を避けるために、頭蓋骨の露出を1回のカットで行います。
2. 綿で骨膜をそっと取り除き、冠状縫合糸を特定します。
3. 保護メガネを装着し、561 nmレーザーのスイッチを入れ、ブレグマ+3 mm左に印を付けます。
4. レーザーのスイッチを切り、上記のマークされた座標に直径4mmの穴をあけたステッカーを貼り付けます。
5. マウスにベンガルローズ(10μL / g)を腹腔内に注入します。.レーザービームを頭蓋骨から4〜5 cmの位置に置き、561 nmレーザーのスイッチを入れて、頭蓋骨を20分間照らします。
6. 頭蓋骨に0.9%生理食塩水を2滴垂らして水分を補給し、傷口を縫合し、動物を37°Cの回復チャンバーに入れて麻酔から回復させます。1時間後、マウスを温度管理された部屋のケージに戻します。
7. 手術後3日間、12時間ごとに鎮痛剤を注射します(4 mg / kgカルプロフェンと0.1 mg / kgブプレノルフィン)。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
561nm波長レーザー	ソルナ	コボルトHS-03
C57Bl/6Jマウス	チャールズ川	664
コリメータ	ソーラブ	F240APC-A
コトンズ	NOBAヴェルボンドミテルダンツ	974116
エタノール 70%	CLNケミカリアンラボルベドルフ	521005
ファインハサミ	FSTの	15000-00
鉗子	FSTの	11616-15
ヒーティングブランケット	FHC DC温度コントローラー	40-90-8D
イソフルラン	修道院長	B506
保護メガネ	レーザー 2000	NIR-ZS2-38
ローズベンガル	シグマ・アルドリッチ	198250-5G
生理 食塩 水	ブラウン	131321
定位フレーム	ストールティング	51500ユーメン
イソフルラン麻酔システム	ドラゲ
リン酸緩衝生理食塩水PH:7.4	Apotheke Innestadt Uni München	P32799