出典:Gou, W. et al.マウスの肝内膵島移植中の注入後の門脈出血の最小化。J. Vis. Exp.(2021年)
この動画では、膵島細胞を肝門脈に注入し、その後、ジェルフォームを塗布して出血を防ぐ手順を説明します。術後出血は、膵島移植中の高死亡率の一般的な原因です。
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方法論記事
膵島移植のマウスモデル:門脈に膵島を注入する外科的方法と術後出血の予防
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2025年7月8日
この記事について
要約
プロトコル
1. 膵島移植
- マウスを全身麻酔下で2%イソフルランで誘導し、維持します。動物の適切な麻酔を確保するために、ペダル反射の欠如を確認してください。
- マウスの腹部の毛皮を剃って取り除きます。
- 術前に 1 回投与するブプレノルフィン (0.1 mg/kg i.p.) を投与します。
- 2%ヨウ素と75%アルコールを交互 に3回拭き取り、手術部位を消毒します。
- マイクロハサミで開腹術を行い、1〜1.5cmの切開を行います。
- リトラクターで腹腔を開きます。以下に詳述するように、方法Aまたは方法Bのいずれかに従います。
方法A:(ジェルフォームで出血を止める、図1A)
- マウスの準備
- 切開部の周りに滅菌ガーゼを置きます。
- 鉗子を使用して腸をそっと引き出し、ガーゼの上に保ちます。
- ポータル静脈をその位置で識別し、よく露出させます。
- 手術全体を通して、温かい生理食塩水湿ったガーゼで腸を覆います。
- プリロードされたインスリン注射針を十二指腸近くの門脈に通して、膵島に挿入します(図1B)。これを行うには、穴(ベベル)を下に向けて針を保持し、壁を貫通する前に、開口部の角度を門脈壁と平行に配置します。
- プランジャーを引いてシリンジに血液(20-50μL)を吸い込み、最初に小島を混合します。
- 膵島をポータル静脈にゆっくりと注入し、プランジを繰り返し引っ張ったり押したりします。
- 注入部位を覆うようにジェルフォーム(約0.5cm×0.5cm)を置きます。
- ゲルフォームを綿の先端で押し下げながら、門脈から針を引き抜きます。
- ジェルを約2分間押し続けて、活発な出血がないことを確認します。
- 綿の先端をロールオーバーしてジェルフォームから離し、ジェルフォームが門脈をしっかりと覆うことを確認します。
方法B:(脂肪パッドで出血を止める、図1C)
- 門脈を徹底的に露出させます。
- 2つの綿の先端を使用して、露出した門脈を左側と右側の両方から保持します。
- 十二指腸と門脈の間の脂肪組織パッドを特定します。
- 針を門脈に挿入する前に、脂肪パッドを貫通します(図1D)。
- 上記の方法Aで説明したのと同様の手順に従って、膵島に注入します。
- コットンチップで脂肪を押し下げながら針を引き抜きます。
- 針を取り外した後、ファットパッドを1分間押し続けます。
- 門脈からの出血がないことを確認したら、腸を元の位置で静かに腹腔に戻します。
- 閉鎖する前に、0.5 mLの温かい生理食塩水(36-37°C)を腹腔内に置いておきます><。 手記：温かい生理食塩水は、手術後の腸の動きと回復を促進し、腸の壊死を防ぎます。
- 5-0縫合糸で筋肉層を閉じます。
- 4-0縫合糸で皮膚層を閉じます。
- 麻酔から完全に回復するまで、マウスを加熱パッドの上の清潔なケージに置きます。
- 鎮痛剤(例:.、ブプレノルフィン0.1mg / kg i.p.)を12時間ごとに提供し続け、手術後48時間には補助熱を提供します><。 注:膵島移植の手順は、完了するまでに約15〜20分かかります。
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結果
図1:肝内膵島移植手順の図解。(A、C)。メソッドAとメソッドBで使用される主要なステップの概略図(B、D)。膵島は、門脈(C)を介して直接注入するか、脂肪パット(D)を介して間接的に注入されました。
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開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 10% 中性緩衝ホルマリン v/v | フィッシャーサイエンティフィック | 23426796 | |
| 針付き1mLシリンジ | AHSの | AH01T(アフ01T) | |
| 20mLシリンジ | BDの | 301031 | |
| 25G x 5/8インチ皮下注射針 | BDの | 305122 | |
| アルコール調製パッド、滅菌済み | フィッシャーサイエンティフィック | 22-363-750 | |
| 動物麻酔システム | VetEquip株式会社 | 株式会社901806 | |
| ブプレノルフィン塩酸塩、注射剤 | パー滅菌製品LLC | NDCの42023-179-05 | |
| エタノール絶対(200プルーフ)、分子生物学グレード | フィッシャーサイエンティフィック | BP2818500 | |
| 極細マイクロ解剖はさみ4 "ストレートシャープ | ロボズ手術器具株式会社 | RS-5882 | |
| ゲルフォーム(吸収性ゼラチンスポンジUSP) | ファルマシア&アップジョンカンパニー | 34201 | |
| グレーフ鉗子4 "超デリケートチップ | ロボズ手術器具株式会社 | RS-5136 | |
| 加熱パッド | アマゾン | B07HMKMBKM | |
| Hegar-Baumgartnerニードルホルダー5.25インチ | ロボズ手術器具株式会社 | RS-7850 | |
| 27ゲージ針付きインスリンジ | BDの | 879588 | |
| ヨウ素調製パッド | フィッシャーサイエンティフィック | 19-027048 | |
| イソフルラン | ピラマル救命救急 | NDCの66794-017-25 | |
| ポリプロピレン縫合糸4-0 | メッド・ベット・インターナショナル | MV-8683 | |
| ポリプロピレン縫合糸5-0 | メッド・ベット・インターナショナル | MV-8661 | |
| 塩化ナトリウム、0.9%点滴液 | VWRの | 2B1322Qの | |
| 外科用ドレープ、滅菌済み | メッド・ベット・インターナショナル | DR1826 |
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