出典:Mason, J. B. et al. Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice. J. Vis. Exp. (2018)
このビデオでは、マウスモデルから無傷の卵巣を採取する外科的処置について説明します。
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方法論記事
マウスからの無傷の卵巣採取:マウスモデルから完全な卵巣を分離するための外科的処置
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2025年7月8日
この記事について
要約
プロトコル
動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。
1. 老齢マウスへの無傷卵巣の移植
>注:このプロトコルは、若いマウス(60日齢)から同じ近交系の生殖後雌(12ヶ月齢)への卵巣の移植中に使用される手順を説明しています。同じ手順が、任意の2匹の雌マウス間の卵巣移植に使用されます。
- 例えば、ケタミン、キシラジン、アセプロマジン(65 mg / kgケタミン、13 mg / kgキシラジン2.0 mg / kg、アセプロマジン、カクテル用量-6.5 ml / kg)のカクテルを使用して、腹腔内注射(I.P.、27 ga 針)によってドナー動物の体重を量り、麻酔をかけます。.麻酔が効くまで、動物を加熱された家庭用ケージに戻します。
- 麻酔をかけたら、動物をホームケージから取り出し、加熱したペーパータオルの上に置きます。バリカン(#40ブレードが望ましい)を使用して、肋骨のすぐ下から始めて遠位に移動し、腹臥位マウスの両側に約2〜3 cm四方のクリップされた「パッチ」を準備し、正中線を覆う約1〜2 cmの毛のストリップを残します。
- クリップされた部分を70%エタノールで軽く拭き、綿の先端でクリップされた部分にベタジン溶液を塗布します。
- 目の保護のために抗生物質ジェルを塗布し、メロキシカム(2.0 mg / kg)を動物の首の外側側面に皮下(SC、27 ga needle)投与して、術後の痛みを和らげます。.
- 動物を加熱された滅菌手術場に腹臥位に置き、70%エタノールを浸した2 cm x 2 cmの綿ガーゼでクリップされた領域を拭きます。
- 1.0〜1.5cmのパラランバー切開を行い、下にある筋膜から皮膚を鈍く解剖します。筋膜を通して別の切開を行います。腹腔に達するまで、この筋膜の下でできるだけ表面的に横方向に鈍く解剖 します
- 切開部(2 cm x 2 cmのガーゼから切り取ったもの)に小さな外科用ドレープを置き、滅菌生理食塩水でドレープを濡らします。
- 小さな鉗子を使用して、腹腔内の卵巣を囲む脂肪組織を特定し、脂肪パッドと卵巣をそっと抽出して、濡れたガーゼドレープの上に置きます。卵巣脂肪パッドは、周囲の脂肪組織よりも「白く」見えます。
- 1.5インチのブルドッグクランプをファットパッドに置き(卵巣滑液包を遮らないように注意してください)、処置中にトラクトを所定の位置に保持します。
- 解剖顕微鏡を所定の位置に移動し、卵巣滑液包を明確に識別します。時計メーカーの2本の鉗子で滑液包をつかみ、卵巣の反対側にある卵巣滑液包を切開して卵巣を露出させます。滑液包の意図したアクセス領域が高度に血管新生されている場合は、注射器でエピネフリン(1:100,000)を滑液包表面に一滴塗布して、裂傷時の出血を減らします。.
- 卵巣を卵巣滑液包からそっと取り出し、出血を防ぐために時計職人の鉗子で卵巣門を締めて卵巣を切除します。
- ドナーの卵巣を4°Cの滅菌生理食塩水で満たされた時計ガラスに入れ、ゆるく覆い、移植の準備ができるまで脇に置きます。
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開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 解剖顕微鏡 | 作動距離を調整できる解剖スコープ。 | ||
| 温水リサーキュレーターと、あなたのサイズの外科/回復分野に適したパッド。 | ストライカー/ゲイマー | TP700 | 循環水パッドは、均一で一貫した温度の動作および回復フィールドを生成します。 |
| 手術器具-生殖管へのアクセスのための解剖器具 | 特定の手術器具の選択は、非常に外科医特異的です | ||
| 卵巣滑液包の縫合材料 | e縫合糸 | 2809G:9-0または2810G:10-0エチロンブラック5インチBV130-5テーパー | 10-0縫合糸は、手術場に落とすと見つけにくくなります。 |
| 吸収性ゼラチンスポンジ | ファイザー | ゲルフォーム ファイザー 09-0315-08 | 滅菌条件下で小さな(~2mm)小片に切断します。 |
| スキンクロージャーのステープル | ベクトン・ディキンソン | MikRon オートクリップ 9mm (BD 427631) | |
| 目の軟膏。 | MWI獣医供給株式会社 | Puralube 滅菌光学軟膏 | |
| 麻酔、鎮痛、エピネフリン用の注射器 | MWI獣医供給株式会社 | BD 305536 | 27g x 3/8in、皮内ベベル1 / 2ml |
| 生理食塩水用注射器。 | MWI獣医供給株式会社 | BD 309657。 | 3mLシリンジ、ルアーロックチップ、27g針 |
| クリッパー/ブレード | アンディス | Super AGR+ ™ コードレス 取り外し可能なブレード クリッパーと CeramicEdge® #40 ブレード。 | 細かい刃のバリカン。 |
| エタノール | 大学の化学物質供給 | 70%に希釈して使用してください。 | |
| ベタジン溶液 | MWI獣医供給株式会社 | 3233名 | |
| 2x2ガーゼパッド | MWI獣医供給株式会社 | 3073 | 手術パック付きオートクレーブ滅菌済み |
| ホウケイ酸ガラスビーズ | シグマ・アルドリッチ(株 | Z273619 | シンチレーションバイアル中のオートクレーブ |
| 4-ビニルシクロヘキセンジエポキシド | シグマ・アルドリッチ(株) | 94956 |
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