マウスモデルにおける膵臓生体内イメージングウィンドウの設置:マウス膵臓微細構造のタイムラプスIn vivoイメージングのための統合膵臓イメージングウィンドウ

要約

出典: Park, I. et al. Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window. J. Vis. Exp. (2021)

このビデオは、膵臓の微細構造の縦方向のタイムラプス高解像度イメージングのために、膵臓を腸から分離するための膵臓イメージングウィンドウを埋め込む手順を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 手術

1. 滅菌手術用プラットフォームを準備し、70%エタノールで表面を滅菌します。
   手記：縦断的なイメージングセッションでは、無菌技術が不可欠です。
2. チレタミン/ゾラゼパム(30 mg / kg)とキシラジン(10 mg / kg)の混合物でマウスを麻酔します.
   手記：高血糖の悪影響があるため、ケタミンの代わりにチレタミン/ゾラゼパムの使用をお勧めします。.実験の目的に応じて最適な麻酔を選択する必要があります。
3. 恒温制御の加熱パッドを備えた直腸プローブを使用して体温を監視します。
4. マウスの左脇腹を剃り、アルコールとヨウ素ベースのスクラブを交互に3ラウンド塗布します.
   手記：脱毛クリームを使用する場合は、化学火傷を避けるために1分以上放置しないでください。.
5. マウスの左脇腹に1.5cmの切開を行い、皮膚と筋肉を解剖します。
6. 切開縁に黒またはナイロンの4-0縫合糸を使用して巾着縫合を行います。
7. 切開部にマイクロリトラクターを使用し、脾臓をそっと露出させます。
8. リング鉗子で脾臓を慎重にプールし、膵臓を特定します。
9. マウスの側面に窓を置き、窓の空いたスペースに脾臓と膵臓を通します。膵臓の操作は、出血や膵炎を引き起こす可能性があるため、非常に穏やかでなければなりません。
   手記： 腹腔内の腸から膵臓を隔離するための膵臓生体内イメージングウィンドウをカスタム設計します(図1A、B)。
10. 膵臓をイメージングウィンドウのプレートにそっと置きます。脾臓は窓の空いたスペースに配置されます。
11. イメージングウィンドウの縁にN-ブチルシアノアクリレート接着剤を滴下します。
    1. 塗布する接着剤の量を最小限に抑えるために、塗布には31Gのカテーテル針を使用してください。滴の量が多いと、ティッシュが意図せずに窓やカバーガラスに付着します。
12. 12 mmの丸いカバーガラスをイメージングウィンドウの余白にそっと貼り付けます。
13. 縫合糸ループを引っ張って窓の横方向の溝に収まるようにし、3回結びます。
14. これらのマウスが目覚めているときにタイトなステッチが中断されるのを防ぐために、結び目の最大の近位部位をカットします。
15. マウスを麻酔から回復させ(2〜3時間)、ケトプロフェン(5 mg / kg、動物の首または腰の付け根の緩い皮膚に皮下投与)を注射して痛みを和らげます。痛みの兆候を12時間ごとに再評価し、ケトプロフェンを24時間ごとに1〜3日間検討する必要があります
    手記：鎮痛は、グルコースに応答してインスリン分泌に影響を与えます。鎮痛の選択とタイミングは、実験目的のために個別化する必要があります。
16. マウスをケージに収容し、窓がケージに接触しないように十分な寝具を用意してください。窓の手術をせずにネズミと一緒に家を収容することは避けてください。

結果

図 1.膵臓の生体内イメージングウィンドウの設計と写真。(A)膵臓の生体内イメージングウィンドウの3Dおよび断面図。(B)膵臓イメージングウィンドウの前方および後方の写真。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
カバーガラス円形	マリエンフェルド	111520	膵臓イメージングウィンドウ用カバーガラス
アイリスシザー	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD (ジュンドバイオ&プラント)	S-1107-10	この製品は、他社の製品と交換できます
ロックタイト401	ヘンケル	401	N-ブチルシアノアクリレート接着剤
マイクロニードルホルダー	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD (ジュンドバイオ&プラント)	H-1126-10	この製品は、他社の製品と交換できます
マイクロリトラクター	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD (ジュンドバイオ&プラント)	17004-03	この製品は、他社の製品と交換できます
マイクロ鉗子	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD (ジュンドバイオ&プラント)	F-1034	この製品は、他社の製品と交換できます
ナイロン 4-0	アイリー	NB434	非吸収性縫合糸
オムニカン N 100 30G	Bブラウン	FT9172220S	血管カテーテルは針部分のみ使用
膵臓イメージングウィンドウ	Geumtoエンジニアリング	カスタムオーダー	膵臓イメージングウィンドウ - カスタムオーダー
フィジオスイート	ケントサイエンティフィック	PS-02	恒温温度コントローラー
リング鉗子	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD (ジュンドバイオ&プラント)	F-1090-3	この製品は、他社の製品と交換できます
ロンプン	バイエル	ロンプン	麻酔薬
ゾレチル	ビルバック	ゾレチル100	麻酔薬
BALB/Cヌード	オリエントバイオ	BALB/Cヌード	BALB/Cヌード

名 の