順行性灌流モデル:単離されたマウス心臓を灌流するためのEx Vivo技術

要約

出典:Omatsu-Kanbe, M. et al., An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice. J. Vis. Exp. (2021).

このビデオでは、孤立したマウスの心臓の順行性灌流技術について説明しています。その間に灌流液が左心室から注入され、最終的に心筋全体に灌流されます。この方法は、マウスモデルから心筋細胞を単離し、さらなるダウンストリームアプリケーションのための脱細胞化心臓を生成するために使用できます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

>1. マウスの心臓の順行性灌流

>注:心臓を吸引するために使用されるプラスチック製の移送ピペットは柔らかく、先端に向かって急激に先細りにならないようにする必要があります。セレーション付きの小さな血管クランプを選択してください。推奨される機器は、資料の表に記載されています。

1. マウスの心臓の切除と大動脈のクランプ
   手記：成体マウス(>8週齢)は、ペントバルビタールナトリウム(>300 mg / kg、腹腔内[i.p]注射)とヘパリン(8000 unit / kg)の過剰投与によって安楽死させる必要があります。.
   1. 吸うことでマウスの心臓をすばやく切除します。
      1. 胸腔をすばやく開いて心臓を露出させます。先端が露出した心臓とほぼ同じか、それよりわずかに小さいプラスチック製のトランスファーピペットをカットします(通常は0.5mLのマークから先端に向かって約1cmの場所にありますが、心臓のサイズによって異なります)。
      2. 心臓をピペットに吸い込み、ピペット....

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
延長チューブ	Top, 日本	X1-50	シリンジと注射針で接続して、順行性灌流を行います。
ヒーターマット	夏目製作所、日本	KN-475-3-40	灌流プレートを温める装置。
輸液ポンプ	TERUMO, 日本	TE-311	順行性灌流用の輸液シリンジポンプ。
注射針(27ゲージ)	TERUMO, 日本	NN-2719Sの	左心室に挿入するための針。
インスリン(ウシ膵臓由来)	Sigma-Aldrich, アメリカ	I5500	0.1 M HClに溶解します。
プラスチックシリンジ(20mL)	TERUMO, 日本	SS-20ES	CIB-EGTAの注入に使用します。
血管クランプ	Karl Hammacher GmbH、 ドイツ	HSE 004-35	大動脈のクランプに使用される小さなまっすぐな血管クランプ。
他のすべての試薬	ナカライ・テスク(日本)

の