マウス鼠径リンパ節体積解析:マウスモデルにおける鼠径リンパ節の体積を決定するための超高周波超音波イメージング技術

要約

出典: Vitiello, M. et. al., Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma. J. Vis. Exp. (2021)

このビデオでは、超高周波超音波イメージングを使用してマウスモデルの鼠径リンパ節をイメージングする技術を示します。この非侵襲的なイメージング技術により、動物のリンパ節体積の経時的な変化をモニタリングすることができます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. イメージング手順

1. マウスをガス麻酔用の誘導チャンバーに入れ、動物が完全に麻酔されるまで純酸素中に3%イソフルランを供給します。足の挟み込みに対する反応の欠如によって麻酔の深さを確認します。
2. 動物を加熱されたボード(UHFUSイメージングステーションの構成部分)に移し、動物を仰臥位に保持します。ワセリンで潤滑された直腸プローブを使用して体温を測定します。マウスの体温を生理学的範囲(36°C±1°C)に維持するために、ボードの温度を調整します。
3. 麻酔中の乾燥を防ぐために、マウスの目を獣医軟膏で湿らせます。麻薬性ガス(純酸素中の1.5%イソフルラン)をマウスの鼻マスクから供給します。イソフルランの割合を調整して、正しい麻酔の深さを維持します。
4. 前足と後足を導電性ペーストでコーティングし、ボードに埋め込まれたECGプレート電極にテープで貼り付けます。生理学的パラメータ(心拍数、呼吸信号、深部体温)が正しく取得され、表示されていることを確認してください。
5. 脱毛剤を塗布して両方の鼠径部から毛を取り除き、音響カップリングメディウムでコーティングします。
6. UHFUSリニアプローブ(中心周波数40MHz)をUHFUSイメージングステーションに組み込まれた専用の3Dモーターにクランプし、プローブの自動的かつ段階的な移動を可能にします。
7. 超音波プローブの向きを適切に調整して、鼠径リンパ節の短軸画像(左/右)を取得し、関心領域を焦点ゾーンに配置します。
8. 前述のように、鼠径リンパ節の全体積を一連の 2D B モード画像としてスキャンします。マイクロメートルスケールのステップサイズでトランスデューサーを直線的に動かすことにより、リンパ節の複数のレベルで画像を取得し、自動的に呼吸および心臓同期のシネループに関する3Dデータを生成します。
9. 次のパラメータで画像記録を設定します:スキャン距離は2〜5mmの範囲(リンパ節のサイズによって異なります)、ステップサイズ44μm、結果は46〜114スキャンステップ/リンパ節スライス、および動物あたり1〜3分の取得時間。取得した画像をRAW形式(DICOM)でデジタル保存し、さらにオフラインで分析します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
B6です。Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) マウス	ジャクソン研究所	13590
ブルージェル	スーフ・イアリア		点眼液ゲル
IsoFlo(イソフローラン)	ゾエティス		気体麻酔用液体
シグマゲル	パーカー		電極ゲル
トランスソニックジェルクリア	テリックSAU		超音波ゲル
ヴィート	レキットベンキーザーIT		脱毛クリーム
コンパクトなデュアル麻酔システム	富士フイルム、ビジュアルソニックス株式会社		ノーズコーンとインダクションチャンバーを備えたイソフルランベースの麻酔システム
MX550Sの	富士フイルム、ビジュアルソニックス株式会社		UHFUSリニアプローブ
Vevo 3100	富士フイルム、ビジュアルソニックス株式会社		UHFUSシステム
Vevoイメージングステーション	富士フイルム、ビジュアルソニックス株式会社		UHFUSイメージングステーションと加熱ボードを備えたAdvancing Physiological Monitoring Unit(アドバンスト・バイオジカル・モニタリング・ユニット)
Vevoラボ	富士フイルム、ビジュアルソニックス株式会社		超音波画像後処理用ソフトウェアプラットフォーム