マウスからのレチナールカップ抽出:マウスの眼から無傷のレチナールカップを得るための外科的処置

要約

出典: Jiang, K. et al. Determination of Mitochondrial Respiration and Glycolysis in Ex Vivo Retinal Tissue Samples. J. Vis. Exp (2021)

このビデオは、マウスの眼球から外側の覆い層のない網膜カップを分離するプロトコルについて説明しています。抽出された網膜組織は、網膜細胞で発生するさまざまな代謝経路の研究に役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 網膜カップ解剖

1. 安楽死に関する制度的ガイドラインに従って、CO₂窒息によるマウスの安楽死.
   手記：安楽死に必要な時間よりも長く動物を_CO2チャンバーに放置しないでください。
2. 眼球を摘出し、ペトリ皿中の氷の古い1x PBSバッファーに入れ、解剖顕微鏡下に置きます。
3. 眼球の外側に付着した余分な直筋をマイクロハサミで切って丁寧に取り除き、視神経を切断します。
4. 30Gの針を使用して角膜(リンバス)の端に穴を開けます。これがマイクロハサミの挿入部位として機能します。次に、細かい解剖顕微鏡はさみを使用して、角膜の端に沿って円形の切り込みを入れ、角膜を後眼カップから分離します。
5. 鋭い解剖鉗子を使用して、角膜、水晶体、および硝子体液をアイカップから離します。
6. 細かい解剖マイクロハサミを使用して、アイカップの縁にある強膜層にいくつかの小さな切り込みを入れます。網膜層を切断することは避けてください。2つの鋭い解剖鉗子を使用して、切り傷の両側の強膜組織を保持し、強膜層を非常に慎重に引っ張って神経網膜から取り除きます。これをアイカップの周りで繰り返し、すべての強膜が取り除かれ、無傷の網膜カップが得られるまで
繰り返します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
1X PBSの	サーモフィッシャー	14190-144
30ゲージニードル	BDプレシジョングライド	305106
バイオプシーパンチャー、1 mm	インテグラミルテックス	33から31AA
CO2窒息チャンバー
解剖鉗子-デュモン#5	ファインサイエンスツール	11251から10	ストライトチップ
解剖鉗子-デュモン#7	ファインサイエンスツール	11274から20	湾曲した先端
解剖顕微鏡
グレーフ鉗子	ファインサイエンスツール	11051から10	湾曲、鋸歯状チップ
マイクロハサミ	ファインサイエンスツール	15004-08	湾曲した先端