頂端切除新生児マウスモデル:新生児マウス心臓の再生能力を研究するために心室頂点を切断する外科的処置

要約

出典:Li, Y. et al.成体マウスへの新生児マウス心臓マクロファージの移植。J. Vis. Exp. (2021年)。

このビデオでは、新生児マウスの心臓の左心室尖を外科的に除去する手順を示します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 新生児1日齢Cx3cr1 ^GFP/+マウス(C57BL/6背景)における根尖切除術

1. 麻酔
   1. すべてのマウスの子犬をケージから取り出し、清潔な乾いた箱に入れます。
   2. 各マウスを氷に約2〜3分間埋め込みます。凍傷を防ぐために、氷とマウスの子犬の間にラテックスやガーゼなどの薄いバリアがあることを確認してください。
   3. 次の兆候を観察することにより、十分な麻酔を特定します:皮膚の色が薄い、手足の動きの欠如、およびペダル反射の欠如。
2. 開 胸
   1. ブロンズ製の手術台を-20°Cで一晩予冷し、麻酔を維持します。
   2. 麻酔をかけたマウスをアイスボックスから取り出し、ブロンズ製の手術台に置きます。医療用粘着テープを使用して、マウスを手術台に仰臥位で固定します。
   3. マウスを置いたオペレーティングプラットフォームをステレオスコープの下に置きます。
   4. マウスの胸部は、ベタジンと70%アルコールを染み込ませたプレップパッドを使用して、または施設の方針に従って
   消毒します。
   5. 胸腔の4番目の肋間領域で1cmの切開で皮膚を切開し、次に心臓がアクセスされるまで顕微手術用ハサミを使用して肋間筋を分離します。
   6. 2つの鉗子を使用して胸部と腹部を交互に押し、機械的な損傷なしに心臓が胸部から外出するまで
   押します。
   7. 小さな切開部の上下に肋骨を自然な固定としてセットし、心臓を固定します。
3. 心室尖切除術
   1. 左心室の頂点を見つけます。ステレオスコープ下で虹彩切除ハサミを使用して、直径1mmの心室尖組織を切断します。
   2. 左心室が露出していることを確認し、にじみ始めます。
   3. 綿棒を使用して心臓を胸腔にそっと押し戻します。
   4. 8-0を使用して筋肉、肋骨、皮膚を縫合しますプロレン縫合糸。
   5. 手術後はマウスを徹底的に清掃してください。
4. 術後のケア
   1. マウスを手術プラットフォームから37°Cの加熱ブランケットに移し、手術後すぐに体を温めます。
   2. マウスのアナビオーシスは、自発呼吸の回復、皮膚の色が淡い色からピンク色に変化し、手足の動きなどの兆候を観察して確認します。
   3. 操作したマウスが回復したら、マウスを母親に戻します。
   4. 必要に応じて、操作したマウスを母親の巣材と混ぜます.
      手記：生後1日の子犬を一度に母親から取り除き、すべての子犬が回復したら一度に全員に戻すことが重要です。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
新生児心臓解離キット	Miltenyi Bio Tech, Teterow, ドイツ	130-098-373