マウス尾部リンパ浮腫モデル:マウス尾部に持続性リンパ浮腫を作製するためのIn vivo技術

要約

出典:Hassanein, A. H. et al., A Mouse Tail Lymphedema Model. J. Vis. Exp. (2021).

このビデオでは、間質組織空間に異常な体液が蓄積し、尾の腫れを引き起こすマウス尾部リンパ浮腫をin vivoで生成する技術について説明しています。このモデルは、リンパ浮腫のメカニズムと治療法の研究に適用されます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. マウス尾リンパ管の外科的破壊

1. 8週齢のC57BL/6マウスを男女比で同数にしてください。
2. マウスを100%酸素中に3〜4%イソフルランを入れた誘導チャンバーに全身麻酔下を置き、その後、処置中に1〜3%で鎮静剤を維持します。
3. 疼痛コントロールのために0.5 mg / kg徐放性(SR)ブプレノルフィンを皮下投与します.
   手記：術後に投与される追加の鎮痛薬:カルプロフェンは24時間ごとに1回、少なくとも48時間、ブピバカインは切開が行われた後または切開を閉じる前に1回、皮膚の端に滴下して適用します(最大4〜6時間持続します)。
4. マウスを背側に配置し、尾部に70%イソプロピルアルコールを調製します。
5. 手順の前に、キャリパーを使用してテールの基部から20mmから5mm刻みでテールの直径を測定します。これらの測定値は、円錐台頭方程式を使用して体積を計算するために使用されます。
6. 基部から20mmの尾に3mmの円周方向の切除をマークします。
7. 滅菌済みの外科用ブレード(サイズ15)を使用して、3mmの全層皮膚切除を細心の注意を払い、外科的顕微鏡倍率の下ですべての基礎となる血管系を無傷のままにします。最初に真皮を通して上周マーク(テールベースから20 mm)を切開し、続いて最初の切開から遠位3mmの円周方向の全厚切開を切開します
   1. 2つの切開部を接続するために、垂直な全層の垂直切開を行います。歯のある細いピックアップを使用して前縁をつかみ、マイクロハサミを使用して、真皮への無血管面の深部と静脈外膜の浅部を慎重に解剖します。
8. 0.1 mLのイソスルファンブルー(1%)を尾の先端の近位
に皮下注射します。.
9. 手術用顕微鏡下で、外側尾静脈に隣接する2つのリンパ管を特定します。イソスルファン注射により、リンパ管は青く見えます。ストレートの顕微手術用ハサミを使用してリンパ管を切除します。はさみを使用して、側静脈とリンパ管の間の平面を慎重に解剖します。次に、片方のハサミの刃先をリンパ管と側静脈の間に通し、ブレードを閉じてリンパ管を横断します。
10. 尾の傷を滅菌済みの付着性透明な包帯で包装します。術後の切開を毎日チェックして、感染や出血がないことを確認し、2週間創傷ケアを提供します。
11. 尻尾へのさらなる損傷を防ぎ、動物が互いに噛み合うのを防ぐために、動物を単独で飼育します。これは外科的合併症につながります。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
手術用顕微鏡	ライカ、ヴェッツラー、ドイツ	MSV266
粘着性ドレッシング(テガダーム)	3M、ミネソタ州セントポール。	1626W
C57BL/6マウス	ジャクソン研究所	664
マイクロアドソン鉗子 - 1x2歯	ファインサイエンスツールズ(USA)Inc.	11019-12
使い捨て針30GX1	フィッシャーサイエンティフィック	305128
操作ハサミ	フィッシャーサイエンティフィック	12-460-796
イソスルファンブルー(リンファズリン)50mg/5ml	マイラン	67457から220から05

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