方法論記事

尿路感染症モデルの作成:尿路感染症モデルを開発するためのマウスに尿路病原菌を投与する技術

2025年7月8日

この記事について

要約

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出典: Luyts, N. et al., Bioluminescence Imagingを用いたマウスにおける尿路感染症の縦断的追跡調査とその治療。 J. Vis. Exp.(2021年)。

このビデオでは、マウスの尿路感染症モデルを生成するための尿路病原菌の膀胱内投与の技術について説明します。このモデルは、泌尿器系内での尿路病原性細菌感染の広がりと、UTIの感受性を決定するメカニズムを理解するために使用できます。

プロトコル

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1. 動物の接種

  1. 動物の準備
    1. 研究課題とノックアウトラインの利用可能性、実験の詳細、およびUTI感受性の違いに応じて、目的のマウス系統を選択してください。経尿道的カテーテル法は雌マウスの方が簡単であることに留意してください。8週未満の動物は免疫学的に未熟であるため、使用しないでください。ここでは、12週齢の雌C57Bl/6Jマウスを使用しました。
    2. 動物は事前に十分に注文し、理想的には7日間順応させます。動物を個々の換気ケージにグループ化し、標準的な12時間の明るい/暗い条件下で行います。
    3. 信号の損失を制限するために、動物の腹部を剃ります。脱毛クリームは動物の皮膚をすぐに火傷する可能性があるため、使用しないでください。利き手で剃りながら、利き手ではない手で首筋と後肢をしっかりと保持して動物を拘束します。あるいは、イソフルラン麻酔下で剃ります.
      手記：動物は、動物が剃った領域をさらにグルーミングすることを考慮して、イメージングの2日前に剃られました。
    4. 実験全体を通して、水と標準的な食物を自由に提供します。ただし、点眼中の膀胱容積を最小限に抑えるために、点眼の2時間前に動物を水から奪ってください。.
    5. 滅菌済みの24 G血管カテーテルチップを100 μLシリンジに取り付け、シリンジに細菌溶液を充填します。
  2. 動物の点滴
    1. 動物を誘導室に入れ、キャリアガスとして純酸素を含むイソフルランを吸入して麻酔します(誘導3%、維持1.5%)。
    2. 1匹の動物を仰臥位の作業面に置き、点眼中はノーズコーンを使用して安定したイソフルラン麻酔を維持します。.目の軟膏を塗ります。
    3. 穏やかな圧迫を加え、恥骨上領域で円を描く動きをすることにより、残留尿を排出します。点眼前に70%エタノールで下腹部を洗浄します。.
    4. カテーテルの先端を生理食塩水で潤滑します。利き手でない方の人差し指を腹部に当て、優しく上に押し上げます。尿道のカテーテル挿入を90°の角度(垂直)で開始し、抵抗に遭遇したら、さらに挿入する前に水平に傾けます(0.5 cm).
      手記：カテーテルを無理に押し込むと尿道に害を及ぼすため、絶対に押さないでください。穏やかな回転動作は、カテーテル挿入に役立ちます。一方、抵抗の欠如は通常、膣への誤った挿入を示しています。
    5. 50 μL の細菌接種 (2 x 107 CFU) のゆっくりとした (5 μL/s) 点滴を行います。
      手記：大量またはより速い点滴は、腎臓への逆流を引き起こす可能性があります。このテクニックの練習中、ブルーインクを使用して逆流を評価することができます。
    6. 点眼後、シリンジとカテーテルをさらに数秒間所定の位置に保持し、漏れを防ぐためにゆっくりと引っ込めます。大量の漏れや血まみれの口道などの不規則性を記録し、必要に応じて動物を除外します。
    7. 動物をイメージングチャンバーのノーズコーンに仰臥位に置き、残りのすべての動物について前の手順1.1.1〜1.1.6を繰り返します。実験グループごとに1つのカテーテルを使用します。麻酔が継続されていることを確認し、最初の動物と最後の動物の間の時間を最小限に抑えます。
    8. 必要に応じて、イメージングの前または後に抗生物質または実験薬を投与します(ステップ3)。例えば、エンロフロキサシンを投与するには、エンロフロキサシン(100 mg/mL)溶液40 μLを生理食塩水3.96 mLに加えて、1/100希釈液にします。午前9時と午後5時に100μL / 10gを皮下注射して、10 mg / kgのエンロフロキサシンを1日2回3日間投与します。.

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開示事項

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利益相反は宣言されていません。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
Aesculap ISISの エイスクラップGT421ヘアトリマー、GT608キャップ付き
麻酔気化器 ハーバード・デバイス・リミテッド該当なしhttps://www.harvardapparatus.com/ harvard-apparatus-anestheticvaporizers.html
BDインサイトオートガード24 GA BDの382912黄色の血管カテーテル、点眼には滅菌プラスチックチップを使用
C57Bl/6Jマウス ジャンヴィエ 該当なし
ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水、Gibco サーモフィッシャーサイエンティフィック リファレンス14040-083
エタノール70%変性5L VWRインターナショナル85825360
Hamilton GASTIGHT シリンジ、PTFE ルアーロック、100 μL シグマ・アルドリッチ2620350μLのゆっくりとした細菌注入を確実にするため
Iso-Vet 1000mg/g Dechra 獣医製品該当なし イソフルラン
型

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タグ

UTI

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