フィラメント挿入に基づく一過性脳卒中モデル:マウス脳の中大脳動脈閉塞術を行う外科的処置

要約

出典:Llovera, G., et al.マウスの脳卒中のモデリング:外部頸動脈を介した一過性中大脳動脈閉塞。J. Vis. Exp (2021年).

このビデオでは、シリコンコーティングされたフィラメントベースの中大脳動脈閉塞を使用して、マウスモデルで一過性脳卒中を発症する手順について説明しています。開発されたモデルは、ヒトの脳卒中を模倣しているため、脳卒中を治療するための新しい治療戦略の調査に役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 材料と楽器の準備

1. ヒートブランケットを接続して、手術部位の温度と麻酔中のマウスの体温を37°Cに保ちます。
2. オートクレーブのはさみと鉗子は、70%エタノール溶液を準備し、デクスパンテノール眼軟膏、綿の数枚、および5-0コーティングされた編組ポリエステル縫合糸を使用できるようにしておきましょう。動物の切開部位を水分補給するために、0.9%生理食塩水(針なし)を含む1mLの注射器を準備します。麻酔ガス(100%O₂ +イソフルラン)を準備します。
3. レーザードップラープローブ用のホルダーは、10μLのピペットチップ(長さ3〜5mm)の先端をカットして準備します。|
   注:すべての器具は、ホットビーズ滅菌器を使用して滅菌されます。また、手術の前後に微生物消毒スプレーで表面を消毒します。手術前に、マウスの頭部と胸部の周囲を創傷消毒スプレーで消毒します。

2. レーザードップラーの準備

1. 手術の30分前にマウスに鎮痛剤を注射します(4 mg / kgカルプロフェンと0,1 mg / kgブプレノルフィン、腹腔内)。
マウスをイ
2. ソフルラン流量4%の誘導チャンバーに入れて、自発的な体の動きと振動が停止するまで麻酔をかけます。
3. マウスを手術エリアの腹臥位に置き、マウスの鼻を麻酔マスクに入れます。イソフルラン濃度をさらに1分間4%に保ち、その後、イソフルラン濃度を減らして2%に保ちます。
4. マウスの体温を37°Cに維持するために、関連するフィードバック制御加熱パッドをセットし、直腸プローブを静かに挿入して、手術中の温度を監視します。
5. 両目にデクスパンテノール眼軟膏を塗ります。.
6. 左目と耳の周りの皮膚と毛を70%エタノールで消毒します。
7. 左耳と目の間(長さ1cm)の頭皮を切開し、頭蓋骨を露出させます。
8. 側頭筋を切って引退させ、頭蓋骨の下のMCAを視覚化します。
9. レーザードップラープローブ/ファイバーを左MCAの上に保持している先端の外側部分を接着剤で固定します。次に、皮膚を接着して、チップホルダーの周りの傷を閉じます。硬化剤接着剤を2〜3滴塗布して、プロセスをスピードアップします。レーザードップラーファイバーが接着されておらず、いつでもチップホルダーから簡単に取り外せることを確認してください。

3.過渡MCAoモデル(オクルージョン)

1. マウスを仰臥位に回します。鼻を麻酔コーンに入れ、足をテープで固定します。
2. 胸の周りの皮膚と毛を消毒し、首に長さ2cmの正中線を切開します。
3. 鉗子を使用して、皮膚と顎下腺を引き離します。リトラクターを使用して胸骨乳様突起筋を保持し、手術野を露出させ、左総頸動脈(CCA)を見つけます。結合組織や周囲の神経を含まないCCAを(迷走神経を傷つけることなく)解剖し、分岐前に一過性の結紮を行います。
4. 外頸動脈 (ECA) を解剖し、最も遠位に見える部分で永久的な結び目を作ります。ECA の下の分岐部の近くに別の縫合糸を配置し、後で使用するために緩い結び目を準備します。
5. 内頸動脈(ICA)を解剖し、その上に微小血管クリップを分岐部の5mm上に置きます。迷走神経を傷つけないように注意してください。
6. ECA のタイトなライゲーションとルーズなライゲーションの間に小さな穴を開けます。ECA 全体を切断しないように注意してください。
7. フィラメントを導入し、CCAに向かって進めます。ECAのルーメンの周りの緩い結紮を締めて、フィラメントをその位置にすぐに固定し、微小血管クリップを取り外すときに出血しないようにします。
8. 微小血管クリップを取り外し、レーザードップラーで測定された脳血流の急激な減少(>80%)を検出することにより、MCAの原点に到達するまでICAを介してフィラメントを挿入します。ECAの周りの結び目をさらに締めて、フィラメントをこの位置に固定します.
   手記：フィラメントが適切な方向に進むと、フィラメントはスムーズに進行し、抵抗は観察されません。
9. フィラメント挿入前後のレーザードップラー値を記録します。
10. 創傷を縫合する前に、リトラクターを取り外し、胸骨乳様突起筋と顎下腺を再配置します。レーザードップラープローブを取り外し、動物を37°Cの回収チャンバーに1時間(フィラメントが除去されるまで)置きます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
45°傾斜	H&S Kunststofftechnik		高さ: 18 cm
5/0の脅威	ピアソールズ	10C103000
イソフルラン麻酔システム	ドラゲ
ベパンテンポマード	バイエル
C57Bl/6Jマウス	チャールズ川	000664
鎹	FSTの	12500-12
刈る	FSTの	18055-04
クリップホルダー	FSTの	18057-14
コットン	NOBAヴェルボンドミテルダンツ	974116
エタノール 70%	CLNケミカリアンラボルベドルフ	521005
エタノール 96%	CLNケミカリアンラボルベドルフ	522078
エタノール99%	CLNケミカリアンラボルベドルフ	ETO-5000-99-1
フィラメント	ドッコル	602112PK5RE
細い45角度の鉗子	FSTの	11251から35
細い鉗子	FSTの	11252から23
ファインハサミ	FSTの	14094-11
膠	オレクセルン	BSI-112
硬化剤接着剤	ドレクセルン&メーア	BSI-151
ヒーティングブランケット	FHC DC温度コントローラー
イソフルラン	修道院長	B506
イソペンタン	フルーカ	59070
レーザドップラ	危険にさらされた	PF 5010 LDPM、ペリフラックスシステム 5000
レーザードップラープローブ	危険にさらされた	〒91-00123
回収室	メディヒート
シリコンコーティングフィラメント	ドッコル	602112PK5RE
バンナススプリングシザーズ	FSTの	15000-00