マウスモデルにおける大腸内視鏡ガイド下ピンチ生検:マウス結腸から組織サンプルを視覚化および抽出する技術

要約

出典:Montrose, D. C., et al. Performing Colonoscopic-Guided Pinch Biopsies in Mice and Evaluating Subsequent Tissue Changes. J. Vis. Exp. (2021)

このビデオは、マウスで大腸鏡ガイド下ピンチバイオプシーを実行するためのプロトコルを示しています。この技術は、結腸の内腔を視覚的に分析し、詳細な研究のために組織サンプルを収集するのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 大腸内視鏡検査と創傷導入

1. 最初に1.9mmの硬質内視鏡をシースに挿入して、内視鏡のコンポーネントを事前に組み立てます(図1A-B)。付属のチューブを使用して、エアポンプ(結腸通気を提供するため)を、作業チャネルの隣のシースの左側にあるガスバルブに取り付けます(図1C).
   手記：ここで説明するレンズは0°ですが、この目的には30°レンズも使用できます。
2. 作業チャネルが開いた位置にあることを確認し、作業チャネルを介して3 Fr生検鉗子を挿入し、シースの端まで進めます(シースからはみ出さないようにしながら)(図1C)。組み立てた内視鏡を、製造元の指示に従って光源とビデオイメージングデバイスに取り付けます。
3. 誘導チャンバー内で酸素を含む5%イソフルランでマウスに麻酔をかけます。次に、マウスを腹側に加熱システム(低体温症を予防するため)を含む内視鏡的病期分類プラットフォームに移動し、酸素を含む2%イソフルランを含むノーズコーンを使用して麻酔下で維持します。麻酔下での乾燥を防ぐために、目に獣医軟膏を追加します。マウスが完全に麻酔されていることを確認するには、後足をそっとつまんで反射をテストします.
   手記：この技術では、マウスの任意の系統または性別のいずれかの系統を使用できます。ただし、マウスは少なくとも8週齢であることが望ましいため、手順に十分な大きさであることが望ましいです。
   1. 麻酔下での乾燥を防ぐために、目に獣医軟膏を追加します。
   2. マウスが完全に麻酔されていることを確認するには、後足をそっとつまんで反射をテストします。
4. 3 mLシリンジに、室温リン酸緩衝生理食塩水(PBS)を取り付けたラット強制針で満たします。マウスの肛門に約1cmの針を刺し、PBSをやさしく注入して糞便をきれいにします。いくつかの糞便ペレットは、注入されたPBSとともにマウスから出る必要があります.
   手記：過剰な量のPBSを点眼すると、内腔に泡が形成され、内腔が見えなくなる可能性があります。
5. 組み立てた内視鏡をマウスの肛門に0.5cm挿入します。生検鉗子を直腸の内腔に進め、鉗子の完全な「顎」(ヒンジを含む)が鞘の端を超えるようにします(ビデオモニターで観察されるように)。鉗子を90°回して、顎が東西の向きに開くようにします。
6. 生検するには、鉗子を開いて約1cm進め、鉗子を閉じ、滑らかな動きで鉗子を閉じたまますばやく引き戻します。
   1. 生検を行うときは、結腸を完全に膨らませないでください。したがって、このステップ中はガスバルブの右側を開いたままにしておきます。ただし、鉗子を開くと、結腸がこの位置にあると粘膜が損傷する危険性があります。

結果

図 1:生検を実施するために必要なアイテム。(A)レンズ(a)、シース(b)、生検鉗子(c)の画像。(B)レンズをシースに挿入します。(C)シースの作業チャネル(実線の矢印)を介した鉗子の挿入。破線の矢印は、エアポンプの正しい取り付け位置を示します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
生検鉗子、3 Fr	カールストルツ	61071ZJ
コロビュータワーシステム	カールストルツ	お問い合わせ会社
検査用シース、9 Fr、キット	カールストルツ	61029DK
ホプキンス望遠鏡、0フィート、1.9 mm x 10 cm	カールストルツ	64301のAA
イソフルオラン	コトラス	2905
PawflyMA-60アクアリウムポンプ	アマゾン	該当なし