大腸内視鏡下マウス創傷モデル:結腸から生検誘発創傷床を分離して治癒過程を理解する方法

要約

出典:Montrose, D. C., et al. Performing Colonoscopic-Guided Pinch Biopsies in Mice and Evaluating Subsequent Tissue Changes. J. Vis. Exp. (2021).

このビデオでは、詳細な分子分析のために適切な時点で結腸内視下創傷床を分離する手順について説明します。この分析は、消化管の炎症状態における創傷治癒過程を理解するのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 分子解析のための創傷床の収集

1. 生検の翌日に、CO₂ 窒息とそれに続く子宮頸部脱臼 (または同等の技術) を使用してマウスを安楽死させます。
2. 皮膚と腹部の筋肉を開いて体腔を露出させることにより、結腸の遠位領域を収穫します。閉じたハサミを結腸の下に置き、そっと持ち上げて下にある腸間膜から解放し、結腸の中点と肛門で結腸を切ってマウスから取り除きます。
3. 氷冷した1x PBSで満たされた20mLシリンジに取り付けられたラット強制針を使用して糞便の内容物を洗い流し、結腸を濾紙の上に置きます。.
4. 濾紙で結腸を縦方向に切り開き、腸間膜側が濾紙に対して下を向くようにします。ティッシュペーパーの上に置いたまま、スクイーズピペットを使用して粘膜に0.2%メチレンブルーを塗布し、余分なメチレンブルーを排出します。解剖顕微鏡で結腸を観察し、創傷床を特定します(図1A)。
5. 4インチのマイクロアイリスハサミを使用して、筋肉層に切り込まないように注意しながら創傷床(図1A、破線の円)の周りを切り取り(筋肉が望ましくない場合を除く)、解剖した創傷床を細いポイントピンセットを使用してチューブに移し、スナップフリーズまたは希望の保管方法を行います。
   手記：この方法で採取された組織の量は、RNA-seqまたは同等の解析のためにRNAを抽出するのに十分です。

結果

図 1:創傷床の生体外および切片画像。(A)生検の2日後にマウスから結腸を採取し、0.2%メチレンブルーで染色し、解剖顕微鏡で画像化しました。破線の円は、創傷床の端を示しています。黒い線は、切片化のために埋め込む前に創傷床/結腸を二等分する適切な位置を示しています。(B)創傷床のH&E染色切片の代表的な画像。アスタリスクは創傷床を示し、矢印は傷床に隣接する無傷の陰窩を示し、負傷した領域の境界を示します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
生検鉗子、3 Fr	カールストルツ	61071ZJ
イソフルオラン	コトラス	2905
メチレンブルー	シグマ・アルドリッチ	M9140
マイクロアイリスハサミ	インテグラ	18-1619
#10ブレードのスカルパル	ヒルロム	372610

名 の