ウサギからの心肺ブロックの収穫:ウサギモデルから機能的な心肺ブロックを回収するための外科的処置

要約

出典:Pacheco-Baltazar, A., et al. Isolated Lung Perfusion System in the Rabbit Model. J. Vis. Exp. (2021)

このビデオでは、ウサギモデルから機能的な心肺ブロックを外科的に採取する手順を示しています。収穫されたブロックは、さらなる生理学的、薬理学的、または生化学的研究に使用できます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

>1. 装置および装置の準備

1. 機器の手配:
   1. ウサギの体重に応じたサイズの手術台を設置します。
   2. 人工胸部のカバーを鋼製の柱に取り付け、その下にガラスチャンバー、側面にローラーポンプ付きのベンチレーター
   を取り付けます。
   3. カバーが気管カニューレが気管と一直線になるように簡単に傾いていることを確認して、より迅速な接続を可能にします。
2. 人工胸部:
   注:これはシステムの重要な部分です。これは、特別なカバーで密封されたウォータージャケットガラスチャンバーで構成されています。カバーは、気管とそれに埋め込まれた血管をカニューレ状にするための接続部を備えた臓器ホルダーとして機能します。
   1. 圧縮空気で作動するベンチュリジェットを設置し、人工胸部内に負圧を発生させます.
      手記：換気制御モジュール(VCM)は、吸気圧と呼気終末圧、呼吸数、総サイクル持続時間に対する吸気持続時間の比率を別々に調整することができます。
3. 装置：
   1. 正常に動作する装置が、人工胸部を保持するベースプレートに取り付けられたメインスチールコラムで構成され、その上と気泡トラップ付きの予熱コイルの後ろにニューモタコメーターと重量トランスデューサ
   が配置されていることを確認します。
   2. 1つの差圧トランスデューサをニューモタコメータに接続し、もう1つをチャンバー圧力に接続します。胸部の後ろに別の圧力トランスデューサーを2つ設置して、灌流圧と静脈圧を測定します。
   3. 酸素供給器の下の切り替えストックを水平電極で接続し、装置の横にある換気システムを接続します。

>2. 心肺ブロックの外科的摘出。

1. 麻酔：
   1. 鎮静剤(キシラジン)とバルビツール酸(ペントバルビタール)の組み合わせを使用してください
      手記：さまざまな麻酔カクテルを使用でき、実験結果に影響を与えることはありません。
   2. まず、健康なニュージーランドのウサギを塩酸キシラジン(3〜5 mg / kg)の1回の筋肉内注射で鎮静させます。.注射の数分後にさらに操作できるように、ウサギが落ち着いてリラックスしていることを確認してください。
   3. 鎮静後、ペントバルビタールナトリウム(28 mg / kg)の静脈内注射でウサギに麻酔をかけるためのアクセスとして、辺縁(外側)耳静脈を使用します。.
2. モニタリング：
   1. 不十分な麻酔や心臓および呼吸機能の過度の低下を避けるために、次のパラメータを監視します。.麻酔の深さを評価するには、つま先のピンチテストを実行します。
   2. 粘膜がピンク色であることを確認してください。青または灰色の色合いは低酸素症を示します。
   3. 心拍数が120〜135拍/分であること、および体温が36.5°Cを下回らないことを確認してください。
3. 動物の配置:
   1. ウサギの胴体を剃り、動物を仰臥位で手術台に置きます。換気システムをテーブルの近く、ウサギの頭の後ろに配置して、気管切開後すぐにカニューレを接続できるようにし、ティスラーの損傷を防ぎます。
4. 切開と気管切開:
   1. 横隔膜から首まで3〜5cmの腹側正中線切開で皮膚を解剖します。
   2. 手術ハサミで、2つの軟骨リングの間の気管の前部2/3を切断し、気管線維膜を通して気管カニューレを挿入します。
   3. 5 mm(外径;OD)気管カニューレを気管線維膜を通して、4-0シルク縫合糸を使用して慎重に固定します。
   4. 鉗子またはピンセットを気管の下に置いて、カニューレが気管に対して曲がらないようにします。
5. 陽圧換気:
   1. 肺が人工胸部の外側にある限り、手術中の肺の虚脱を避けるために、小型種の呼吸ポンプを使用して陽圧を換気します。
   2. 気管切開後すぐに、胸部が開く前に、呼吸ポンプに接続された気管カニューレを介して換気を開始します。
   3. 一回換気量を10 mL / kg><に設定します。 手記：実験のセットアップと人工胸部モデルに応じて、陰圧を供給するために使用したのと同じ換気ポンプまたは別のポンプで陽圧換気を行い、迅速な再カニューレ挿入を可能にします。
6. 開胸術と放血術:
   1. 胸腔にアクセスするには、メスまたはハサミを使用して胸郭壁を開き、胸郭の上部3分の1まで内側胸骨切開術を行います。
   2. 胸部の半分を2つのリトラクターで開いたままにします。通常、いくつかの肺フラップが心臓を取り囲んでいます。
   3. 上大静脈と下大静脈をローカライズし、それらをスレッドで参照します。
   4. 動物の放血前に、右心室を特定し、1000 UI / kgのヘパリンを注射します。.
   5. 注入直後は、前ループ糸で上大静脈と下大静脈を結紮し、抜血を行います。
7. 心肺の収穫:
   1. 心肺ブロックを優しく素早く収穫します。直接デジタル解剖またはスプリングハサミを使用して結合組織を分離し、胸部から肺を取り除きます。
   2. その領域の血管系と食道を解剖します。
   3. 胸骨手膜を切開して、内側胸骨切開術を気管カニューレに向かって伸ばし、両側の気管を接続組織から解放します。
   4. 次に、気管カニューレの上の気管を切除します。気管と肺の背側固定が切除されるときに、頭蓋尾軸でカニューレを静かに引き上げます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
2 ストップ Tygon E-Lab チューブ、内径 3.17 mm 、12/パック、ブラック/ホワイト	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	73-1864
IPL-4の陽圧換気用アダプター	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-4312
IPL-4の代替無圧ガス供給:負の換気中に室内空気とは異なる混合ガスを気管に供給する	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-4309
ウサギから胎児へのブタ分離灌流肺のベースユニット	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-4138
ウシ血清A2:D41アルブミン凍結乾燥粉末	シグマ	3912	500グラム
差圧式低圧トランスデューサ DLP2.5、レンジ +- 2.5 cmH2O、HSE コネクタ	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-3882
差圧トランスデューサMPX、範囲+-100 cmH2O、HSEコネクタ	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-0064
エタノール絶対HPLCグレード	カレドン
ハーバード蠕動ポンプP-230(コントロールボックスとP-230モータードライブ付き)	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒70-7001
加熱式リニアニューモタコメーター 0 〜 10 L/min の流量範囲	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒59-9349
シングルニューモタコメーター用ヒーターコントローラー 230 VAC、50 Hz	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒59-9703
ヘパリン	ピサ		5000 UI
IPL-4 Core System for Isolated Rabbit to Fetal Pig Lung, 230 V	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-4296
ラウダサーモスタットサーキュレーター、タイプE-103、230 V / 50 Hz、バス容量3 L、温度範囲20〜150°C	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-0125
IPL-4用圧力調整器付き負圧換気制御オプション	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-4298
ニュージーランドのウサギ
PISABENTAL(ペントバルビタールナトリウム)	ピサ	質問番号 7833-215
PLUGSYSケース、タイプ603* 7	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-0045
PLUGSYS TCMタイムカウンターモジュール	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	73-1750
PLUGSYSトランスデューサアンプモジュール(TAM-A)	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-0065
PLUGSYSトランスデューサアンプモジュール(TAM-D)	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	73-1793
PLUGSYS VCM-4R 圧力調整器付き換気制御モジュール	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	73-1755
PROCIN(キシラシンクロル水和物)	ピサ	質問番号 7833-099
バスケット付きウサギ用肺動脈カニューレ、外径4.6 mm	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-4161
メスナイフ
灌流用サーボコントローラー(SCP)	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-2806
手術用手袋 No. 7 1/2
手術用手袋 No.8
ウサギ用気管カニューレ、外径5.0 mm	ヒューゴ・ザックス・エレクトロニック (HSE)	〒73-4163

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