Cisterna Magnaにおけるトレーサー分子送達:ブタにおけるCisterna Magnaの直接カニューレ挿入による蛍光トレーサー分子送達方法

要約

出典:Bèchet, N. B., et al. Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs. J. Vis. Exp. (2021).

このビデオでは、ブタの脳内の大槽の直接カニューレ挿入によるトレーサー分子送達のプロトコルについて説明しています。この方法は、リンパ系における脳脊髄液の分布を視覚化するのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. カニューレ挿入と注入

>注:この手順は少なくとも2人が必要で、動物の頭を高くし、首を曲げた状態で実行されます。

1. 外科的にアクセス可能な大槽で事前に手術された麻酔をかけた豚から始めます。
2. 1人が動物の頭と首を持ち上げて曲げ、もう1人が大槽を触診してその解剖学的位置をメモすることを確認します。
3. 22Gのカニューレを硬膜を通って大槽に縦軸に対して斜めの角度でゆっくりと慎重に導入します
   手記：カニューレを深く挿入しすぎると、脳に損傷を与える可能性があるため、挿入しないでください。カニューレをどこまで挿入するかを知ることは、カニューレが硬膜を貫通する感覚を理解する経験が必要です。基本的に、硬膜に穴が開けられたのと同じように、カニューレはトレーサー注射を成功させるのに十分な深さになります。この深さは約3〜5 mmですが、動物のサイズや年齢によって異なります。カニューレ挿入の成功は、カニューレを上昇する透明で脈動性のCSFの視覚化を通じてすぐに明らかになるはずです。最良の結果を得るためには、安楽死させた動物で事前にいくつかのカニューレ挿入を練習して、硬膜ピアスを理解することをお勧めします。
4. 針をカニューレから引っ込め、ロックにキャップを取り付けます。
5. まず、カニューレが組織に入る場所に瞬間接着剤と加速剤を塗布し、続いて歯科用セメントを塗布します。セメントが固まるまで5分待ちます。
6. カニューレからキャップを慎重に取り外し、トレーサーを使用して10cm延長されたIVラインタップのオス端をカニューレに取り付けます。
7. トレーサーを手で、またはマイクロインフュージョンポンプを使用して100μL/minの速度でゆっくりと注入し、10cmの延長で3ウェイIVラインタップを取り外し、キャップと交換します。トレーサーは、カニューレの基部で脈動しているのが見えるはずです.
   手記：手で注入する場合は、歯科用セメントがシャフトを覆っている場所の約1〜2mm上のカニューレシャフトにトレーサーがまだ見えるまでこれを行います。
8. 注射後、首の下に土嚢を置いて、ある程度の屈曲を維持します。その後、頭部を解放することができ、動物は休息した腹臥位に置かれます。
9. 自己保持型リトラクターを放し、筋肉を前と同じように配置します。外科用タオルクランプを使用して、筋肉の上で皮膚を一緒にします。
10. タオルクランプと切開部をガーゼで覆い、次に毛布で熱損失を抑えます。
11. トレーサーを所望の時間循環させてから、静脈内 ペントバルビタール注射(140 mg / kg)で動物を安楽死させます。聴診器による聴診時の心音の欠如による安楽死を確認します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
18Gニードル	メディク
1mlシリンジ	フィッシャーサイ	15849152
20Gカニューレ	メディク	NAの
22Gカニューレ	メディク	NAの
ウシ血清アルブミン Alexa-Fluor 647 コンジュゲート	サーモフィッシャー	A34785 (英語)	2バイアル(10mg)
CaCl2	シグマアルドリッチ	C1016
歯科用セメント	アグントス	7508
グルコース	シグマアルドリッチ	G8270
Insta-Set CA アクセラレータ	BSI株式会社	BSI-151
IVラインTAP、10cm延長付き3ウェイ	ブラウン	NAの
KClの	シグマアルドリッチ	P9333型
マーカーペン	NAの	NAの
MgCl2	シグマアルドリッチ	M8266
ミリクウォーター	NAの	NAの
NaCL	シグマアルドリッチ	S7653
NaH2PO4	シグマアルドリッチ	S8282
NaHCO3	シグマアルドリッチ	S5761
塩田	メディク	NAの
自己保持型リトラクター	NAの	NAの
瞬間接着剤	NAの	NAの
外科用湾曲ハサミ	NAの	NAの
外科用タオルクランプ	NAの	NAの

名 の の 型