ウサギのてんかん異常のマルチシステムモニタリング:誘発発作中の同時ビデオEEG,ECG,カプノグラフィー,および酸素濃度計記録の方法

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. ウサギが拘束具に順応し、研究者が心肺速度の安定化を客観的に確認できるようにするために、すべてのウサギに心肺センサーとニューロンセンサーを装着し、1匹あたり1時間、1〜3回、>1時間連続ビデオモニタリングを行います。

2. 投薬実験(ペンチレンテトラゾール、PTZ)

1. 辺縁耳静脈を視覚化するには、ウサギの耳の後面を剃ります。70%エタノールワイプを使用して部位を消毒し、辺縁耳静脈を拡張します。.これは、図 1F の黒い破線の楕円で示されています。
2. この時点で、1人の実験者にウサギの顔を手で覆ってもらい、ウサギへの施術のストレスを軽減します。2 人目の実験者は、滅菌済みの 25-G 血管カテーテルを使用して、辺縁耳静脈を慎重にカニューレ挿入します。
3. カテーテルが静脈に入ったら、カテーテルの端に滅菌注射プラグを配置して、針が薬を静脈内導入できるようにします。インジェクションプラグの位置は、図1Gの青い円で示されています。
4. 4×4インチのガーゼをテープで包んで筒状にし、ウサギの耳の中に入れて添え木を作ります。次に、スプリントを耳にテープで固定し、カテーテルを装着していない耳と同様に、カテーテルが所定の位置に固定され、直立したままになるようにします。
5. ヘパリン食塩水1 mLあたり10 USPユニットを1 mL注入します。
   手記：カテーテルと血管は目に見える形で空気が取り除かれ、特許が保たれている必要があります。カテーテルが血管内にない場合、シリンジは簡単に押されず、皮下組織に生理食塩水が蓄積します。
6. ウサギにPTZの増分用量を1 mg / kgから10 mg / kgまで10分ごとに1 mg / kg刻みで静脈内投与します。各用量の開始時に、どの動物が注射されているか、および薬の濃度を示すためにメモを取ります。
   手記：これにより、PTZ投与の急性および相加的な影響の評価が可能になります。あるいは、低用量PTZの慢性的な影響をさらに評価するために、ウサギに各低用量濃度で反復投与、2 mg / kgで7回、5 mg / kgで3回、次に10 mg / kgで3回投与し、各用量を10分間隔で投与します。
7. 各投与後、神経心臓の電気的および呼吸器的異常、およびてんかん様活動の視覚的証拠がないか、ビデオ-EEG-ECG-カプノグラフィー-酸素濃度測定を注意深く監視します。.これらの変化は、リアルタイムおよび解析後に記録してください.
   手記：発作活動は、PTZ投与から60秒以内に開始されることがよくあります。

図1:機器に接続されたウサギ。(A)ECG電極の位置、左腕は黄色の点で示されています。右腕は白い点で示されています。左脚は赤い点で示されます。右脚の前方の地面は緑色の点で示されています。(B)ECGおよびEEG電極が取り付けられた拘束具のウサギ。(C)ウサギの下のブースター、ネックフォーム、カットされたPVCパイプなど、小さなウサギに対応するために適切な変更を加えた拘束具に入った幼ウサギ。(D)脳波電極の位置を持つ拘束されたウサギ。右正面はオレンジ色の点で示されます。左前頭は赤い点で示されます。右後頭部は黄色の点で示されます。左後頭部は青い点で示されます。参照は黒い点で示されます。(E)光刺激装置とミラーブースのセットアップを備えた拘束装置のウサギ。光源は白い点で示されます。(F)ウサギの耳を剃り、アルコールで拭いた後の辺縁耳静脈。(G)血管カテーテルを左辺縁耳静脈にしっかりとテープで固定したウサギ。注入プラグの位置は青い点で示されています。(H)一方向弁を含むTピースによってカプノグラフィーチューブに取り付けられたフェイスマスクを装着したウサギ。(I)カプノグラフィーチューブに接続されたフェイスマスクとTピースの図。吸気中、室内の空気は一方向バルブ(緑の矢印)を介してTピースに入ることができます。呼気満了中、CO2はカプノグラフィーチューブ(黄色の矢印)に入ることにより、Tピースを離れます。デッドスペースが小さいため、Tピースに保持されるCO2は非常に少なく、通常は5 mmHg未満です。