角膜強膜ボタンの分離:ブタの眼から角膜強膜ボタンを取得するための外科的処置

要約

出典:Okurowska, K., et al. 細菌性角膜炎に対する薬物治療を研究するためのブタのEx Vivo Corneaモデルの確立。

このビデオでは、角膜強膜ボタンを外科的に分離してex vivoブタ角膜モデルを生成する手順を示しています。このモデルは、人間の眼に類似しているため、組織学的、病理学的、および薬理学的研究に役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 滅菌

1. 重要なステップ:蒸留水にDistelの5%(v / v)溶液に1時間浸し、ブラシで洗浄し、水道水ですすぎ、185°Cのオーブンで最低2時間滅菌することにより、すべての鉗子とはさ
みを消毒します。
2. 他のすべてのガラス器具および試薬は、121°Cで15分間オートクレーブして滅菌するか、製造元の指示に従って試薬を調製します。クラスII微生物学安全キャビネットで次の手順を実行します。

2. サンプルコレクション

1. 豚の目のコレクション
   1. 大きな白い在来種の雌豚、ハンプシャーのイノシシとの交配が使用されました。動物は電流で気絶させられ、2時間後に屠殺場で眼を摘出されました。
   2. 重要なステップ:除核したら、滅菌リン酸緩衝生理食塩水(PBS)溶液で眼球を実験室に移し、乾燥を防ぎ、到着後すぐに処理します。

3. 角膜強膜ボタンの準備

1. 滅菌鉗子を使用して眼球を囲む組織を保持し、それをペトリ皿に移します。メスの刃No.15と鉗子を使用して、ペトリ皿の眼球の周りの結膜と筋肉組織を取り除きます。
2. 鉗子で視神経を保持しながら眼球をそっと持ち上げ、滅菌PBSで満たされた0.5Lの瓶に移します。
3. すべての目から周囲の組織を取り除いたら、滅菌鉗子を使用して、PBS中の3%(v / v)ポビドンヨードで満たされた別の0.5Lジャーに移動し、1分間放置します。
4. 眼球を滅菌PBSを含む別の0.5L瓶に移します。
5. 鉗子を使用してペトリ皿に目を静止させ、メスの刃No10Aで角膜の近くに切り込み
を入れます。
6. 重要なステップ:カットの端を保持し、はさみを使用して角膜を切除し、角膜を囲む強膜を約3mm残します。はさみの鋭利な端が虹彩や脈絡膜組織を突き刺さず、脈絡膜上腔にあることを確認してください。
7. 鉗子で角膜強膜ボタンを押し、別の先のとがった端の鉗子を使用してブドウ膜組織を穏やかに分離します。
8. 角膜強膜ボタンを残りのグローブから持ち上げ、12ウェルプレートのPBS中の1.5%(v / v)ポビドンヨウ素溶液で短時間すすぎます。.
9. 角膜強膜ボタンを滅菌PBSで満たされた別の12ウェルプレートに入れます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Cellstar 12ウェルプレート	グライナーバイオワン	665180
ディステル	フィッシャーサイエンティフィック	12899357
鉗子	フィッシャーサイエンティフィック	15307805
PBSの	SLSの	P4417
ペトリ皿	フィッシャーサイエンティフィック	12664785
ポビドンヨウ素	ウェルドリックス薬局	2122828
メス刃数15	フィッシャーサイエンティフィック	O305
メススワンモートン	フィッシャーサイエンティフィック	11849002

型 の