ブタの細気管支組織抽出:ブタの肺から細気管支組織切片を解剖する手順

要約

出典:Harrington, N. E. et al. Antibiotic Efficacy Testing in an Ex vivo Model of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Biofilms in the Cystic Fibrosis Lung. J. Vis. Exp. (2021)

このビデオでは、採取した豚の肺から細気管支組織を抽出する外科的処置について説明します。ex vivo細気管支組織は、慢性肺感染症を研究するための感染モデルの開発に使用できます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. ex vivo pig lung (EVPL) 組織の解剖

1. 屠殺後できるだけ早く指定された供給源から肺を入手し、家庭用の冷蔵ボックスで実験室に輸送することにより、肺が冷たく保たれるようにします><。 手記：屠殺日に近いほど、保管による打撲傷が少なくなりますが、屠殺から最大4日間冷蔵保存された組織も使用できます。保冷ボックスは肉屋や食肉処理場に持ち込む必要があるため、使用後は毎回地元の研究所のガイドラインに従って除染し、使用しないときは微生物学研究所の外に保管して、汚染や封じ込め違反のリスクを減らす必要があります。
2. 滅菌された表面で炎の下で作業し、オートクレーブ処理されたアルミホイルで覆われた清潔なプラスチック製のまな板の上に肺を置きます。細気管支が無傷のままであることを確認してください。食肉処理場や輸送中に損傷があった場合、肺は使用に適していません。
3. パレットナイフを炎の下で加熱し、細気管支の周囲の肺の領域にナイフを非常に短時間触れて、組織の表面を滅菌します。
4. 滅菌されたカミソリの刃を使用して、細気管支を囲む表面組織を切り取ります。損傷を防ぐために、細気管支と平行に切開を行います。
5. 細気管支が露出したら、細気管支を解放するために、見える最高点で細気管支を通して断面切開を行います。
6. 滅菌鉗子を使用して、細気管支の自由端を軽く保持し、滅菌されたかみそりの刃を使用して残っている不要な組織を切り取ります。肺から細気管支を取り除くために枝分かれが見える前に、細気管支を横切って最終的な断面切開を行います。
7. 細気管支を最初のDMEM / RPMI 1640洗浄に入れます。.細気管支を洗浄したままにし、手順1.2〜1.5を繰り返して、必要な同じ肺から細気管支の追加切片を採取し、十分な組織切片を生成します。.

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
70%エタノールまたは同様のもの(表面滅菌およびフラミンゴフ解剖装置用
オートクレーブ滅菌済みのアルミホイルで、肺を解剖するまな板を覆います
ブンゼンバーナー
まな板 - アルコールで簡単に除染できるように、プラスチック板をお勧めします。
肺を研究室に運ぶためのCoolbox
さまざまなサイズの解剖はさみ
ダルベッコの修正イーグルミディアム(DMEM)
フィッシャーブランド 2 mL 強化チューブ	サーモフィッシャー	15545809
大型パレットナイフ
マウントされたカミソリの刃
プラスチック製のまな板とアルミホイルにより、無菌で洗浄可能な解剖面を作成
ロズウェルパークメモリアルインスティテュート(RPMI)1640ミディアム
鉗子の選択(鈍い先端を推奨)
汚染された鋭利物や豚の組織を廃棄するのに適した容器で、お客様の施設の健康と安全に関するポリシーに従ってください。

)