ブタ卵管卵子複合体の単離:体外受精のためのブタ卵巣卵胞から卵雲卵母細胞複合体を単離する技術

この記事について

要約

このビデオでは、ブタの卵巣から卵丘-卵母細胞複合体またはCOCを分離する技術について説明しています。単離された無傷のCOCは、不妊治療を開発するための生殖補助技術である体外受精を実施するために使用できます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. ブタ積雲-卵母細胞複合体の分離

卵巣卵胞の単離のための材料を収集するために、地元の食肉処理場で思春期前の雌豚(生後約6〜7ヶ月、体重70〜80 kg)からブタの卵巣を採取します。各実験で卵丘卵母細胞複合体(COC)を単離するために、10匹の動物から約20個のブタ卵巣を選択します.
手記：各卵巣が3〜5個の卵胞を産むと仮定すると、卵胞の総数は60〜100個です。
1%抗真菌溶液(AAS)を含む滅菌リン酸緩衝生理食塩水(PBS;pH 7.4;38°C)の入った魔法瓶に卵巣を入れます。実験材料が1時間以内に実験室に輸送され、抗生物質を含む滅菌PBSで2回すすがれることを確認してください。
卵巣をすすぎた後、取り扱い培地(HM)(Table of Materials)で満たされたビーカーに移し、すべての操作の時間のために38°Cのインキュベーターに保管します
手記：卵子の取り扱い中に最適な結果を得るには、2.5%の抗生物質/AASと10%のウシ胎児血清(FBS)を添加したDMEM/F12培地(取り扱い培地、HM)ですべての手順を実行し、環境中の

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前	会社	カタログ番号	コメント
全般
抗生物質抗真菌薬 (100x) 100ml	サーモフィッシャー	15240062	ハンドリング媒体の最終濃度は 2.5%、PBS 中濃度は 1% (ステップ 1.2)
DMEM/F12 (500ミリリットル)	シグマ・アルドリッチ	D8062	ハンドリング媒体
FCS(100 ml)	サーモフィッシャー	16140063	ハンドリング媒体の最終濃度は10%です。(ステップ:1.5)
PBS(1x、pH 7.4)500ml	サーモフィッシャー	10010023
成熟媒体
hCG (10,000 Uの1バイアル)	シグマ・アルドリッチ	CG10
PMSGの	バイオベンダー	RP1782721000
特定の機器、ツール
30 mm プテリ皿	TPPとは	93040
60 mm IVFシャーレ	隼	353653
孵卵器	パナソニック	MCO-170AIC-PE	他のブランドも使用可能
滅菌ペトリ皿(10 cm)	NESTバイオテクノロジー	704002
魔法瓶	ケチュア語	5602589	他のブランドも使用可能

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