上涙腺の眼窩葉への注射:ウサギモデルにおけるドライアイ疾患誘発技術

要約

出典:Honkanen, R. A. et al, A Rabbit Model of Aqueous-Deficiency Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Glands: Application to Drug Efficacy Studies. J. Vis. Exp. (2020).

このビデオでは、上涙腺の眼窩葉にコンカナバリンAを注射することにより、ウサギモデルでドライアイ疾患を誘発する手順を説明しています。開発されたモデルは、ドライアイ疾患の治療のためのさまざまな薬剤の有効性を研究するのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 動物の調理法

>注:眼窩涙腺系の部分が注入されます。

1. ウサギをアセプロマジン0.2 mg / kgで皮下鎮静します。.
2. 眼窩周囲と頭皮の部分の毛皮を剪断し、Nairを使用して残っている毛皮を完全に取り除きます。解剖学的特徴とコンカナバリンAの米国誘導注射をよりよく視覚化するために、皮膚を完全に滑らかにします(図1)。
3. 上記のように中程度の鎮静を誘発します。.

2. 眼窩上涙腺(OSLG)の注入

>注:OSLGは急速に続きます。

1. 地球に内側の圧力を加えて、OSLGが後部内側から突き出るようにします。OSLGが後部陰部から隆起している状態で、球体(図2、赤い矢印)に内側圧力をかけます。隆起は、後部窺部を見つけるための肉眼的局在化として機能します。
2. 先端を閉じた湾曲した鉗子を使用して、頭蓋骨の骨の開口部が感じられるまで領域をへこませます。これは、突起の下の前後方向を持つスリット状になります。
3. 鉗子で適度な圧力をかけて皮膚にくぼみを残し、これが針の配置の目印として機能します(図3A)。
4. くぼみマーク (図 3B) ~ 1/4 インチの上の皮膚に垂直な針 (27 ゲージ、5/8 インチの針付きツベルクリン注射器) を陰部に挿入し、注射部位と骨眼窩縁の中間点を目指して、針を後方および外側の眼瞼に向けて外側眼窩に向けて方向転換します
   手記：インシシュアが針で正確に狙われていない場合、頭蓋骨はその進行をブロックします。
5. 針のハブに到達したら、0.2 mLの容量で1000 μgのCon Aをゆっくりと注入します(図3C)。
6. PSLGとOSLGの両方の注入を2〜3分以内に完了します
7. 動物をイソフルラン鎮静剤から取り出します(まだ行われていない場合)。下涙腺(ILG)の注射は、通常、追加の鎮静剤なしで完了できます。.

結果

図1:コンカナバリンA注射用のウサギの調製。(A)小さな鋏を使用して毛皮を取り除き、眼窩上涙腺を識別するためのランドマークの視覚化を容易にします。

図2:眼窩上涙腺の局在化。皮膚の輪郭の変化は、OSLGが後部窺部から突き出ている位置を示しています。地球上に交互に内側圧がかかると(大きな矢印)、上眼窩腺が脱出し、皮膚の小さな隆起として見られます。この標高は、圧力が加えられるたびにサイズが大きくなります(小さ...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
100mmマクロレンズ	キヤノンEF 100mm F2.8L IS USM	3554B002
26ゲージ針(5/8)	ベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパニー、 ニュージャージー州フランクリンレイク	305115	ConAを に注入するための針 涙腺
27ゲージ針(5/8)	ベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパニー、 ニュージャージー州フランクリンレイク	305921	ConAを に注入するための針 涙腺
アセプロイン(アセプロマジン)	ヘンリー・シャイン動物衛生、 オハイオ州ダブリン	NDC11695-0079-8	0.1ml/kg皮下注射 ウサギ用鎮静剤
麻酔気化器	VetEquip、カリフォルニア州プレザントン	アイテム #911103
ビショップハーモン鉗子	ボシュロム(ストルツ)、 ニュージャージー州ブリッジウォーター	E1500-Cの	組織鉗子
キャリパー	ボシュロム(ストルツ)、 ニュージャージー州ブリッジウォーター	E-2404	キャリパーは、 の長さを測定するために使用されます ConA注射中の針
コンカナバリンA	シグマ、セントルイス、ミズーリ州	2010年頃	注射用PBSで5mg / ml ウサギの涙腺に
ウサギ、ニュージーランドホワイトまたは オランダ語のベルト付き(テキストで説明)	Charles River Labs、マサチューセッツ州ウォルサム	2-3キロ	研究動物
サージカルルーペ +1.50	Designs for Vision、ボヘミア、ニューヨーク	特産品	眼球 の壮大さを提供します 裂け目を観察しながら表面 アップしてConcanavalin A を実行します 注射。

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