ウサギ肝癌モデルの生成:肝細胞癌の誘導のために肝臓の左葉に腫瘍組織を移植する外科的処置

要約

出典:Khabbaz, R. C. et al. Development and Angiographic Use of the Rabbit VX2 Model for Liver Cancer. J. Vis. Exp. (2019)

このビデオでは、ウサギの肝臓に腫瘍組織を外科的に移植して肝細胞がんを誘発する様子を実演しています。この手順は、腫瘍の挙動と肝臓がんを標的とする局所領域治療法の開発を研究するための信頼性の高い動物モデルを確立するのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 開腹術による肝腫瘍移植

1. 開腹術のためにレシピエントウサギを準備します。45 mg / kgケタミンと5 mg / kgキシラジンを使用してレシピエントウサギに麻酔をかけ、導入した後、必要に応じて1%〜3%イソフルランによる挿管と維持を行います。.ウサギに麻酔をかけたら、バリカンを使用して手術部位を剃ります。ベタジンスクラブ、70%エタノール溶液、およびベタジン溶液によるトリプリケートウォッシュを使用して切開部を洗浄し、無菌手術方法で腹部をドレープします。.
2. #15ブレードを使用して、剣状突起から始めてウサギの皮膚に小さな下向きの垂直正中線切開を行うことにより開腹術を開始します。これは簡単に触診でき、おおよそアメリカのペニーのサイズになる傾向があります。図 1 を参照してください。
3. 皮膚を反射し、linea albaを特定します。これは、正中線を下方に移動する組織の反射する白い帯である必要があります。鈍い解剖を使用して、alba線を横断し、腹膜を露出させます。.図 2 を参照してください。
   手記： 腹膜は腸の真上にあるため、呼吸で動いているのが見えるため、簡単に識別できます.
   注意： 腹膜は、表面張力により、下にある腸に付着する傾向があります。鈍的外傷を使用して白杉線を解剖すると、下にある腸に穴を開けるリスクを消散するのに役立ちます。
4. 腹膜が露出したら、腹膜を慎重に解剖して腹腔に入ります。これで肝臓を特定できます。腹部の空間をよりよくナビゲートするには、正中線切開を皮膚、筋肉、腹膜を通して1〜2cm下方向に伸ばします><。 手記： 正中線切開の延長は、湾曲した止血器を腹腔に慎重に挿入し、湾曲した先端を腹膜に向けることで簡単かつ安全に行うことができます。次に、止血器を少し開き、ブレードを使用して止血器の2つのアームの間の組織をキュートにします。
5. 腫瘍移植の部位を選択するために、肝臓の左葉を特定します。左葉は、正中線にある内側葉の下外側にあります。
6. 腹膜腔から肝臓を引き抜く前に、切開部の下面に乾いたガーゼを置きます
   手記： ガーゼは、肝臓が腹部に戻るのを防ぐために、肝臓を置くための接着面を提供します。
7. 非外傷性鉗子または湿ったガーゼを指にかぶせて、切開部から腹部から肝臓の左葉を慎重に引き出し、前に置いた乾いたガーゼの上に置きます。図 3 を参照してください。
   注意： 肝臓のカプセルは敏感で、簡単に破裂する可能性があります。この臓器を取り扱うときは、莢膜出血、肝臓の打撲傷、および/または最終的な腹膜血を防ぐために、優しくすることが重要です><。 手記： 通常、肝臓は腹膜腔に入ると視覚的に宣言します。ただし、ウサギの胃が膨らんでいると、肝臓が頭蓋骨から見えなくなる可能性があります。その場合は、鈍いプローブで腹壁をそっと持ち上げます。このシナリオでは、肝臓は表面張力のために横隔膜の腹側に付着する傾向があるため、鈍いプローブを使用して肝臓を慎重に分離し、肝臓を分離する必要があります。次に、非外傷性鉗子を使用して肝臓を引き出します。
8. この時点で、腫瘍組織を移植する準備をし、肝臓を保護するために湿ったガーゼを肝臓にかぶせます。
9. 肝臓への移植用に、1〜3mmの前処理された腫瘍組織を選択します。 図 4 を参照してください。
10. #11ブレードを使用して、肝臓組織を45°の角度で穴を開け、0.5cmの深さのポケットを作り、肝臓嚢の背側を貫通しないように注意します。穴を開けた後は、ブレードをそのままにしておきます。図 5 を参照してください。
11. ブレードを腹側方向にそっと持ち上げて、肝臓床に小さなポケットを作ります。鉗子を使用して腫瘍片を取り、このポケットに腫瘍片を入れてから、ブレードを取り外します
    手記： 腫瘍片を挿入する前にブレードを取り外すことができますが、肝臓から出血し、穿刺部位が不明瞭になり、識別が困難になる可能性があります.
    注意： 意図しない腫瘍の播種を防ぐために、腫瘍と他の構造との接触を最小限に抑えるようにしてください。これは、その後の移植を支援するために使用されるツールを取っておくことでも回避できます。
12. この時点で、ジェルフォームなどの止血剤を腫瘍ポケットの上に置いて、止血を促進し、腫瘍片の排出を防ぎます。
13. 止血が確認されたら、肝臓を腹部に戻します。
14. 簡単な連続縫合を使用してテーパー針の3-0ポリジオキサノン縫合糸で腹壁を閉じ、切断針の4-0ポリグラクチン910縫合糸で連続皮下縫合を使用して皮膚を閉じます.
    注意： 腹壁を閉じるときは、縫合スローで大網や他の腸の構造を傷つけないように注意してください。

結果

図1:露出した剣状突起。 皮膚とその下にある筋肉は、剣状突起(黒矢印)と腸(白矢印)の視覚化を可能にするために反映されています。白い星は頭蓋の方向を示します。

図2:Linea alba。その上にある皮膚と筋膜は、頭蓋から尾の方向に走るlinea alba(黒い矢印)を視覚化できるように反映されています。この領域は無血管性であり、腹膜腔への失血のないアクセスを提供します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
バリカン	ヴァール	41870-0438
ケタミン	ヘンリー・シャイン	56344
キシラジン	アコーン	59399-110-20
湾曲止血	WPIの	501288
非外傷性鉗子	スクラー	〒52-5077
ガーゼ	メドライン	NON21430LF
15ブレード	ステリス	02-050-015
11ブレード	ステリス	02-050-011
サージセル	エチコン	1951
3-0 PDS/テーパー	エチコン	Z305Hの
4-0 ビクリル/カッティング	エチコン	J392Hシリーズ

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