ブタ大動脈の分離:下流分析のためにミニチュアブタから胸部大動脈を切除する外科的処置

要約

出典:Zhao, Y., et al. Isolation and Culture of Primary Aortic Endothelial Cells from Miniature Pigs J. Vis. Exp. (2019年)

このビデオでは、ミニチュアブタから大動脈を外科的に切除する手順を実演しています。これらの単離された大動脈から採取された内皮細胞は、凝固および免疫応答を研究するために、in vitro条件でさらに培養することができます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. ブタ大動脈内皮細胞単離の手術と準備

1. 手術を行う前に、手術室をUVライトで1時間消毒し、医療用消毒剤84液(利用可能な塩素含有量は4.0%〜5.0%、材料表)で消毒します。
2. ミニチュアブタが15 mg / kgケタミン、15 mg / kg塩酸キシラジン、および0.05 mg / kg塩酸フェナセチン(容量:100μL / kg、資料表)(図1A)によって形成された筋肉内注射を受けた後、ブタの痛みを伴う刺激(例:片方の耳をつまむ、または片方の前肢を振る)と生理学的指標(例:. 血圧、 心拍数と呼吸数).
   手記：ブタが目覚める兆候を示している場合は、さらに半分の用量の注射をブタに投与することができます。
3. メスで腹部を切開し、下大静脈を露出させ、その結果、ヘパリンナトリウム(5,000 U、材料表)を5mL注射器で下大静脈に注入します。
4. 5分後、腹部大動脈にカテーテルを挿入して血液を送り、胸部の皮膚を切開し、メスで横隔膜を切開し、続いて左心室を切り取ります
   手記：ブタが安楽死させられることを確認し、血液を流し、心臓を切った後に大動脈脈拍をチェックしてください。
5. 骨鉗子(材料の表)で肋骨を切除し、心臓と肺を露出させます。心臓と肺の後方にある大動脈を見つけ、両端を固定します。予冷した洗浄バッファーである1x PBS溶液(pH 7.4)と1%(v / v)ペニシリン/ストレプトマイシンで大動脈を一度洗浄します。(図1B、C)。
6. 大動脈をハサミで切り取り、大動脈の両端を固定したままにします。滅菌鉗子とハサミで大動脈周辺の余分な組織を切除します。大動脈を50 mLの遠心分離チューブに入れ、予冷した洗浄バッファー3倍(洗浄あたり30 mL)で大動脈を洗浄し、大動脈を実験室に移します(図1D)。

結果

図1:ミニブタの外科的処置と大動脈の切除。(A)ミニチュアブタの写真(バマ)。(B)開腹術および開胸術後に大動脈が露出します。(C)大動脈は両端で固定されています。(D)大動脈を50mLのチューブに入れ、冷間洗浄バッファー

を入れます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
20 x PBS溶液(pH 7.4、ヌクレアーゼフリー)	サンゴンバイオテック	B540627#
75% 医療用アルコール	桂林LiFeng医療用品有限公司
ボーンフォーセプス	Beijing HeLi KeChuang技術開発有限公司 中国	HL-YGQの
BOON ディスポーザブルシリンジ (10ml)	江蘇Yile医療記事有限公司中国
コンパウンドケタミン注射	中国瀋陽の獣医用医薬品工場		塩酸ケタミン:0.3g/2ml、塩酸キシラジン:0.3g/2ml、塩酸フェナセチン:1mg/2ml
鉗子	上海医療機器有限公司中国
ヘパリンナトリウム	Jiangsu WanBang biopharmaceutical Co., Ltd. 中国
ヨウ素チンキ剤	桂林LiFeng医療用品有限公司
ミニチュアブタ(バマまたはウジシャン)	Kang Yi Ecological Agriculture Co.、Ltd、中国
ペニシリン/ストレプトマイシン	ライフテクノロジー	15070063#
鋏	上海医療機器有限公司中国
外科用メス	上海医療機器有限公司中国	22#

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