ウサギの頭蓋骨欠損モデルの生成:骨再生能力の骨代替材料を評価するために、ウサギの頭蓋骨の上部に丸い欠損を作成する外科的処置

要約

出典: Marger, L. et al., Calvarial Model of Bone Augmentation in Rabbit for Assessment of Bone Growth and Neovascularization in Bone Substitution Materials. J. Vis. Exp. (2019).

このビデオでは、関心のある骨サンプル置換材料の骨再生能力を評価するためのウサギの頭蓋骨モデルを生成する外科的手順について説明します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 手術

1. サイトの準備
   1. ウサギをマットレスパッド(火傷防止用)で覆われた加熱パッド(39°C)の上に置き、手術台に置きます。頭皮を剃ります。
   2. 刺激や乾燥を避けるために、目に潤滑ジェルを塗ります。ポビドンヨード(10%)で皮膚をこすり洗いして、部位を消毒します。次に、ウサギを滅菌外科用ドレープで覆い、頭蓋骨のアクセス領域を切り取ります。
   3. 手術部位をポビドンヨード(10%)で2回目に消毒します。刺激や乾燥を避けるために、目に潤滑ジェルを塗ります。
   4. 完全な外科用トレイを置くためのドレープテーブル(滅菌ドレープ)を準備します。
2. 手術部位の開設
   1. 頭蓋骨にリドカイン2%(1 mL)を皮下(SC)注射して局所麻酔します。.
   2. 眼窩から外部後頭部突起(長さ~4cm)まで、頭蓋状矢状線に沿って皮膚を切開します(メスを使用)。骨膜が切開されていることを確認してください。
   3. 切開部の両側で骨膜をゆっくりと持ち上げます(骨膜エレベーターを使用)。滅菌生理食塩水で部位をすすいでください。
3. シリンダーの配置
   1. 頭蓋骨の中央部と冠状縫合糸を見つけます(図2A、B)。これらの解剖学的線は十字形を形成していることに注意してください。シリンダーは、十字によって定義された各象限に配置され、シリンダーの端が縫合糸の上にないことを確認します(図2C)。
   2. 最初のシリンダーを左上象限(左前頭骨)に置き、デバイスを平らに置いてみてください。強い手でその位置に固定し、抵抗が感じられるまでマイクロネジをねじ込みます。ネジの頭がシリンダータブの表面と同じ高さになっていることを確認します。
   3. もう一方のタブで同じ手順を繰り返して、シリンダーを頭蓋骨にしっかりと固定します。シリンダーが骨に密閉されていることを確認してください。
   4. 右上肢(右前頭骨)、左下肢(左頭頂骨)、右下肢(右頭頂骨)で手順を繰り返します。
4. シリンダーによって囲まれた領域内の5つの髄内穴の骨穿孔(図1)
   1. 生理食塩水灌漑(直径0.8 mm、深さ~1 mm)の下に髄内穴を開け、シリンダーで囲まれた領域の中央にある骨に丸いバーを埋め込みます。出血が現れることを確認します。
   2. シリンダーの内側の端にある2本のタブネジを通る軸に沿って、さらに2つの髄内穴を開けます。垂直な斧に沿って、シリンダーの内側の端にさらに2つの髄内穴を開けます。出血が現れることを確認します。
   3. 他の3つのシリンダー内で操作を繰り返します。
5. 材料サンプルとキャッピングをシリンダーに充填する(図3)
   1. 製造元の指示または材料の仕様に従って、目的の代用骨材料を準備します。
   2. 最初のシリンダーを材料サンプルで縁まで満たし、キャップを取り付けてシリンダーを閉じます。他の3つのシリンダーでこのプロセスを繰り返します。
6. 手術部位の閉鎖
   1. 断続的な非吸収性縫合糸でシリンダーの上の皮膚を閉じます。.
   2. 傷口にスプレー可能な包帯を塗ります。

2. 術後治療

1. 鎮痛と麻酔(プロポフォールとフェンタニル灌流停止)の供給を停止し、自律呼吸の回復を確認します。
2. 動物が自律呼吸を回復したら、換気を停止します。完全に目覚める前に、動物を純粋な酸素の下に維持してください。
3. ブプレノルフィン塩酸塩SC(0.02 mg / kg、0.03 mg / mL、0.67 mL / kg)を注射し、術後鎮痛薬として6時間ごとに3日間注射を繰り返します。.
4. 動物を水と完全な給餌で通常の住居に移します。

結果

図1:PEEKシリンダーの仕様。横方向の安定タブには、ねじ込み用の2つの穴(直径0.8mm)が開けられています。円柱で区切られた領域内の頭蓋骨に開けられる5つの髄内穴(直径0.8mm)の位置は、赤い円でマークされています。

図2:ウサギの頭蓋骨の代表的な画像と円柱の配置。 ウサギの頭蓋骨の中央と冠状縫合糸を示す写真で、左右の頭頂骨と前頭骨を描写しています(A、B)。縫合糸の両側にシリンダーを配置します(C)。スケールバー= 5 mm...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
薬
フェンタニル	ビッシェル		鎮痛剤
ケタラール50mg / ml	ファイザー		麻酔用ケタミン
リドヘックス	ビクセル		目のための潤滑ジェル
オピサイト	スミスと甥	66004978	スプレー可能なドレッシング
ポビドンヨウ素10%、ベタジン	ムンディファーマ		抗感染剤
プロポフォール 2%	ブラウン	3538710	麻酔用
ラピドカイン 2%	シンテティカ		局所麻酔
ロンプン 2%	バイエル		麻酔用キシラジン
セボフルラン 5%	アッヴィ		麻酔用
備品
フレゼニウス・バイアル・パイロットC	イメクスメッド		輸液ポンプ
加熱パッド	ハーバード大学装置
吸引ドミナント 50	Medela(メデラ)
サクションチューブ Optimus	プロメディカル	80342.2
外科用モーター	シックデンタル	キューブ	髄内穴の穿孔
換気	Maquetサーボ1
材料
シリンダーとキャップ	ブティプラスト	カスタマイズ	組成:PEEK(ポリエーテルエーテルケトン)
手動自己保持シャフト	グローバルD	ACT1Kの
自己保持シャフト用モバイルハンドル	グローバルD	エムティーエム
セルフドリルねじ	グローバルD	VA1.2KL4	チタングレード5、ISO 5832-3で構成されたクロスドライブネジ
手術用トレー
気管内チューブ Shiley 直径 2,5mm	コヴィディエン	86233	挿管用
気管内チューブ Shiley 直径 4,9mm	コヴィディエン	107-35グラム	挿管用
エチコンプロレン 4-0	エティコン	8581H	非吸収性縫合糸
鉗子	マルセル・ブラン	BD027Rの	145ミリメートル
挿管カテーテル	医療料理		挿管のご案内
丸型外科用バー	パターソン	78000	直径0.8mm、髄内穴の穴あけ
メス	スワン・モートン		10番と15番
鋏	マルセル・ブラン	657	180ミリメートル
シリンジ Omnifix	ブラウン	4616057V	5ml、10ml、50ml
ベンフロンG22	ブラウン	42690985から01	耳の静脈内ラインのVasofixの安全性