ウサギ胚融解:胚移植のための凍結保存されたウサギ胚を回収するための加温手順

要約

出典: Garcia-Dominguez, X. et al., Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model. J. Vis. Exp. (2019)

このビデオでは、ガラス化ウサギの胚を解凍する手順と、最適な胚回収のための予防的な測定手順を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 胚の温暖化

1. 胚を一歩で解凍します。
   1. ミニストローを液体窒素蒸気から10cm水平に20〜30秒間置きます。
   2. ミニストローの内部で結晶化プロセスが開始されたら、ミニストローを25°Cの水浴に10〜15秒間浸します。
   3. ミニストロープラグを取り外し、コットンプラグをカットします。
   4. 結合マイクロディスペンサーを使用して、すべてのミニストローの内容物を 0.33 M スクロース溶液を含むプレートに 25°C の BM 溶液で 5 分間排出します
      手記：このステップは、ガラス化溶液への胚の曝露を減らすために迅速に行う必要があります。
   5. 胚をBM溶液を含む新しいプレートにさらに5分間移動させます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
液体窒素	エア・リキード	P1505XXX
ペトリ皿、35 mm	シグマ・アルドリッチ	CLS430165-500EA
プラスチックドレッシング(ノベクタン)	IBORメディカ	7140028
プラスチックストロー 0.25mL	IMV - テクノロジー	6431
鋏	ロボズ	RS-5880	通常の外科用グレードのスチール製の小さなストレートハサミなら何でも使えます。
滅菌手袋	アルベット・エスカルティ	087GL010075
滅菌ガウン	アルベット・エスカルティ	12261501
滅菌マスク	アルベット・エスカルティ	058B15924Bの
ストロープラグ	IMV - テクノロジー	6431
蔗糖	シグマ・アルドリッチ	S7903
ウォーターバス	レイパ	BAE-4
ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(DPBS)	シグマ・アルドリッチ	D5773	塩化カルシウムなし。