組換えアデノ随伴ウイルスベースの遺伝子導入:げっ歯類モデルにおける導入遺伝子導入および心臓特異的発現のための技術

要約

出典:Ding, J. et al.マウスの心臓の遺伝子を過剰発現またはノックダウンするためのrAAV9の調製。J. Vis. Exp.(2016年)

このビデオでは、マウスの子犬における組換えアデノ随伴ウイルスベースの遺伝子導入を実演しています。この方法は、標的細胞における遺伝子発現の研究に役立ちます。

プロトコル

1. 新生仔マウスを皮下注射によりP0.5-P2.5のrAAV9で治療します。

1. 29G1/2、0.33 x 12.7 mmインスリンシリンジに、組換えアデノ随伴ウイルス9(rAAV9)溶液をあらかじめ充填します。気泡の除去に注意してください。
2. 凍結麻酔をかけた子犬を片手で親指と人差し指で持ちます。注射の前に、70%イソプロピルアルコールで飽和させた綿棒で子犬の背中の皮膚を拭いて、無菌状態を維持します。シリンジ針を動物の前背部皮下組織に5〜10°の角度で挿入します。インスリン注射器を使用して、rAAV9溶液50-70μlを注入します。
   注:rAAV9は、腹腔内または静脈内注射によってマウスに送達することもできます。心臓に送達された遺伝子の効率的な発現を得ることができます。ただし、腹腔内注射では、肝臓で漏れる表現が生じることがあります。注射後、子犬の状態を毎日監視しました。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
rAAV9ベクター	ペンベクトルコア	P1967